Avaliação da molécula de checkpoint imunológico HLA-G em lesões melanocíticas

RESUMO

O antígeno leucocitário humano G (HLA-G) é uma molécula não clássica do complexo principal de histocompatibilidade que tem sido associada ao processo de tumorigênese e escape tumoral. Neste estudo, objetivamos avaliar a expressão de HLA-G em lesões melanocíticas e no melanoma para determinar quando as lesões melanocíticas iniciam sua expressão. Vinte e duas amostras de biópsias de pele foram submetidas à imuno-histoquímica; a expressão de HLA-G foi observada em 63,6% das amostras. Essa expressão nas células melanocíticas foi significativamente maior no melanoma do que em lesões melanocíticas benignas (p < 0,002). Nossos resultados sugerem que a expressão de HLA-G se inicia tardiamente no processo da tumorigênese.

Unitermos:
melanoma; antígenos HLA-G; imuno-histoquímica

ABSTRACT

The human leukocyte antigen-G (HLA-G) is a non-classical molecule of the major histocompatibility complex. HLA-G has been associated with the process of tumorigenesis and tumor escape. In this study, we aim to evaluate the HLA-G expression in melanocytic lesions and in melanoma for determining when melanocytic lesions start its expression. Twenty-two skin biopsies samples were submitted to immunohistochemistry; HLA-G expression was detected in 63.6% of the samples. This expression in melanocytic cells was significantly higher in melanoma than in benign melanocytic lesions (p < 0.002). Our results suggest that HLA-G expression starts late in the process of tumorigenesis.

Key words:
melanoma; HLA-G antigens; immunohistochemistry

RESUMEN

El antígeno leucocitario humano G (HLA-G) es una molécula no clásica del complejo principal de histocompatibilidad que ha sido asociada al proceso de tumorigénesis y escape tumoral. En este estudio, nuestro objetivo es evaluar la expresión de HLA-G en lesiones melanocíticas y en el melanoma para determinar cuando las lesiones melanocíticas comienzan su expresión. Veintidós muestras de biopsias de piel se estudiaron mediante inmunohistoquímica; se detectó la expresión de HLA-G en el 63,6% de las muestras. Esa expresión en las células melanocíticas fue significativamente mayor en el melanoma que en lesiones melanocíticas benignas (p < 0,002). Nuestros resultados sugieren que la expresión de HLA-G empieza tardíamente en el proceso de tumorigénesis.

Palabras clave:
melanoma; antígenos HLA-G; inmunohistoquímica

INTRODUÇÃO

O melanoma é um tumor agressivo, responsável pela maioria das mortes causadas por câncer de pele. Embora a excisão cirúrgica seja eficaz no tratamento do melanoma cutâneo primário, o melanoma metastático apresenta alta taxa de mortalidade. A quimioterapia padrão tem um efeito limitado nesses casos⁽¹.

No entanto, nas últimas décadas, houve uma revolução no tratamento do melanoma. Isso aconteceu por meio de estudos sobre os mecanismos moleculares dessa doença e sobre a imunologia do câncer. Atualmente, duas novas classes de tratamentos sistêmicos estão disponíveis: imunoterapia e terapia direcionada^(2-4).

Os imunoterapêuticos têm como alvo os pontos de verificação das moléculas imunes. Porém, a resposta ao tratamento não é uniforme e é diretamente influenciada pelo microambiente do tumor. É fundamental conhecer o infiltrado de células imunocompetentes no tumor, bem como os fatores e as moléculas produzidos por elas⁽⁵.

A maioria dos cânceres produz vários fatores imunossupressores que impedem a resposta imune. Entre os mecanismos de escape imune das células tumorais, podemos citar a expressão da molécula do antígeno leucocitário humano G (HLA-G). O HLA-G se distingue de outras moléculas de classe I do HLA, principalmente porque possui um polimorfismo genético limitado; sofre recombinação alternativa sistemática do transcrito primário; apresenta expressão de proteína tecidual restrita à placenta (citotrofoblasto invasivo e células epiteliais amnióticas) e a certos tecidos adultos (timo, pâncreas, matriz proximal das unhas e córnea) e eritroblastos; e apresenta funções de tolerância imunológica⁽⁶.

Notavelmente, a expressão da molécula HLA-G pode ser observada ectopicamente em condições patológicas. A expressão do HLA-G nos tumores protege as células cancerígenas das células natural killer (NK) e dos linfócitos T citotóxicos. Assim, a expressão do HLA-G se torna um mecanismo importante no qual as células cancerígenas são utilizadas para escapar da vigilância imunológica do hospedeiro. Hoje em dia, é amplamente aceito que o HLA-G é um marcador crítico de imunotolerância na evasão imunológica de células cancerígenas e está fortemente associado ao progresso e ao prognóstico da doença em pacientes com câncer⁽⁷. O HLA-G é considerado um ponto de verificação imune e sua heterogeneidade nos cânceres tem sido relacionada com o estágio e os efeitos da doença, o status metastático e a resposta a diferentes terapias⁽⁸.

Nesse contexto, nosso objetivo foi avaliar a expressão da molécula HLA-G em lesões melanocíticas e no melanoma para determinar quando a evolução do nevo melanocítico inicia sua expressão.

METODOLOGIA

Amostras

Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética Institucional com Seres Humanos (protocolo 419.570). Os prontuários médicos foram revisados para determinar idade e sexo. Esses estudos foram realizados no Sistema de Saúde Preventivo, Goiânia, Goiás, Brasil.

As amostras foram obtidas após ressecção cirúrgica. Para este estudo, 22 lesões melanocíticas de diferentes subtipos histológicos (melanoma acral, melanoma expansivo superficial, melanoma lentigo maligno, melanoma nodular e nevo melanocítico) de 16 pacientes foram avaliadas.

Imuno-histoquímica

Seções de amostras embebidas em parafina foram coradas com anticorpo monoclonal MEM-G/02 (1/100) que reconhece a cadeia pesada livre de todas as isoformas da HLA-G (Exbio, Praha, República Tcheca). O citotrofoblasto invasivo da placenta humana do terceiro trimestre serviu como um controle positivo da proteína HLA-G. O produto da reação foi visualizado utilizando o Sistema de Detecção Universal Ultratech HRP Streptavidin-Biotin (Immunotech-Coulter, Villepinte, França) de acordo com as recomendações do fabricante. Dez biópsias de pele de mulheres saudáveis que foram submetidas à cirurgia de redução de mama foram utilizadas como controles normais.

Avaliação de cortes corados

A imunorreatividade foi classificada pela avaliação da porcentagem de células positivas, utilizando um método de pontuação semiquantitativo. O sistema de pontuação foi realizado conforme descrito anteriormente por Gonçalves et al. (2015)⁽⁹. Dois patologistas independentes (E. L. Z. e B. W. K.) interpretaram os resultados da coloração do HLA-G.

Análise estatística

Os escores de imunocoloração foram comparados com o teste U de Mann-Whitney. A significância foi definida como p < 0,05 em um intervalo de confiança de 95%. Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando o software RStudio front-end 0.98.507.

RESULTADOS

A coloração imuno-histoquímica revelou que as células HLA-G+ apresentaram um padrão de coloração citoplasmática marrom. Essa coloração também foi observada nas células imunoinflamatórias. Das 22 amostras submetidas à imuno- -histoquímica, 14 expressaram a HLA-G, enquanto nenhuma amostra do controle expressou a molécula. A expressão nas lesões melanocíticas e no melanoma é apresentada em detalhes na Tabela. A expressão do antígeno HLA-G nas células melanocíticas foi significativamente maior no melanoma do que nos nevos (p < 0,002). As amostras femininas apresentaram maior intensidade de coloração do que as masculinas (p < 0,001).

TABELA
Expressão do HLA-G em lesões melanocíticas e de melanoma

Imuno-histoquímica	HLA-G positivo n (%)	HLA-G negativo n (%)	Total n (%)
Pacientes	11 (68,75)	5 (31,25)	16 (100)
Feminino	5 (71,43)	2 (28,57)	7 (43,75)
Masculino	6 (66,67)	3 (33,33)	9 (56,25)
Lesões	14 (63,64)	8 (36,36)	22 (100)
Melanoma acral	1 (100)	0	1 (4,54)
Melanoma expansivo superficial	4 (80)	1 (20)	5 (100)
Melanoma lentigo maligno	2 (50)	2 (50)	4 (100)
Melanoma nodular	2 (100)	0	2 (100)
Nevo melanocítico	5 (50)	5 (50)	10 (100)

• HLA-G: antígeno leucocitário humano G.

DISCUSSÃO

Neste estudo, foram avaliadas lesões que caracterizam a evolução das alterações das lesões melanocíticas durante o desenvolvimento do melanoma. Observamos a expressão do HLA-G em taxas mais diferenciadas de lesões melanocíticas, o que corrobora estudos anteriores que demonstram a expressão do HLA-G no melanoma.

A positividade para o HLA-G em lesões benignas sugere vigilância sobre os nevos melanocíticos. Cerca de 30% dos melanomas são derivados de lesões melanocíticas benignas. Em um estudo retrospectivo envolvendo 850 pacientes cutâneos, Lin et al. (2015)⁽¹⁰ demonstraram que 235 pacientes apresentavam melanoma associado a um nevo melanocítico.

Os tipos histológicos de melanoma expansivo superficial e melanoma acral lentiginoso expressaram HLA-G, sugerindo que a elevação dessa molécula associa-se à transformação maligna nesse tipo de célula, uma vez que o HLA-G é frequentemente expresso em células tumorais e sua expressão relaciona-se com o prognóstico desfavorável em várias neoplasias⁽¹¹.

CONCLUSÃO

Nossos resultados sugerem que a expressão do HLA-G começa em um estágio posterior do processo de tumorigênese. O HLA-G permite prever o potencial de malignidade e fornece novas ideias sobre como melhorar o direcionamento das imunoterapias.

AGRADECIMENTOS

Os autores agradecem o apoio financeiro da Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás.

References

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Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  11 Maio 2020
• Data do Fascículo
  2020

Histórico

• Recebido
  30 Maio 2019
• Revisado
  04 Ago 2019
• Aceito
  20 Ago 2019
• Publicado
  03 Mar 2020