Investigação e desenvolvimento de imunoensaios comparativos para produção de imunoglobulinas contra veneno da cobra (Bungarus sindanus) em aves

RESUMO:

O presente estudo teve como objetivo a detecção, purificação, quantificação do soro antiofídico em ovos de galinha e determinar a eficácia do soro antiofídico extraído em camundongos. Os três grupos de galinhas foram imunizados por doses subletais de veneno de cobra Sindhi krait com óleo de parafina adjuvante + lecitina. As doses de reforço foram injetadas por via subcutânea nos músculos do peito em vários locais após cada duas semanas até oito semanas. Anticorpos-IgY produzidos contra o veneno de Krait foram purificados da gema de ovo pelo método de precipitação com PEG-6000. Os conteúdos de proteína antiveneno-IgY purificada foram quantificados por fotômetro nanodrop enquanto a pureza foi acessada por SDS-PAGE. A especificidade do antiveneno-IgY foi verificada pelo método de Ochterloneys e o título foi estimado por ELISA indireto. A eficácia do antiveneno foi avaliada em camundongos albinos. A IgY purificada exibiu uma única banda de proteína 180-190 KDa em SDS-PAGE sob condição não reduzida e duas bandas 63 - 65 KDa e 22 - 25 KDa correspondentemente condição sub-reduzida. A imunodifusão exibiu linhas de precipitação nítidas de imunocomplexo (veneno e IgY extraída). Em todos os grupos (G1, G2 e G3) o nível do soro aumentou acentuadamente da 3ª para a 4ª semana e manteve-se a partir daí. G2 e G3 apresentaram títulos elevados até diluições de 1:2048, enquanto G1 apresentou diluições de até 1:1024, testado por ELISA indireto. No ensaio de neutralização, a dose ED50 de antiveneno G2 e G3 obtida foi de 400,23ug/camundongos para mais de duas vezes a LD50 e 100% de proteção foi @ 508,84ug/camundongos que neutralizam completamente a dose altamente letal de veneno. Mas G1 ED50 foi de 405,66ug/camundongos e forneceu 100% de proteção @ 554,21ug/camundongos. Antivenenos extraídos, contra veneno de Bungarus sindanus eram altamente puros, seu título de anticorpos e capacidade de neutralização foram produzidos com sucesso a partir de gemas de ovos de galinhas imunizadas pela primeira vez no Paquistão.

Palavras-chave:
IgY de galinha; imunização; Paquistão; Sindi krait; veneno; óleo de parafina e adjuvante de lecitina