Soroepidemiologia de leptospirose em equinos da região de Santarém, Pará

Resumo

Leptospira spp. é a bactéria causadora da leptospirose, uma doença endêmica, distribuída mundialmente, de caráter zoonótico responsável por gerar impacto sanitário e também econômico. Esse microrganismo, com característica espiralada, infecta mamíferos, dentre eles, os equinos. Estes animais, podem apresentar a doença na forma assintomáticos ou clínica. Desta forma, o atual estudo objetivou analisar amostras equinas na região de Santarém- Pará. Analisou-se 88 amostras de animais que não apresentavam histórico de vacinação contra a leptospirose, através da técnica da Microaglutinação Microscópica (MAT), utilizando um painel de13 sorovares, pertencentes a dez diferentes sorogrupos. Desses animais, 58 foram soropositivos (65,90%), distribuídos em 28 (48,3%) amostras soro reagentes para Pyrogenes, 24 (41,4%) para Autumnalis, 18 (31%) para Icterohaemorrhagiae e 16 (27,6%) para Grippotyphosa. Mesmo não havendo suspeita de leptospirose, os animais apresentaram diferentes frequências sorológicas. Considerando-se o conhecido impacto da leptospirose na saúde humana e animal, nossos resultados apontam que é de suma importância estabelecer medidas de prevenção para reduzir perdas econômicas e não oferecer riscos à saúde pública.

Palavras-chave:
Leptospira spp; equídeos; epidemiologia; saúde pública; Pará

Abstract

Leptospirosis is an endemic zoonotic disease that is distributed worldwide, which has the potential to have health and economic impacts. Leptospira spp. is spiral-shaped and capable of infecting mammals, including horses, which may result in asymptomatic or clinical forms. Therefore, the current study aimed to analyze the frequency of anti-Leptospira antibodies in serum samples from horses from Santarém, Pará, Brazil. For that purpose, 88 blood samples from horses without a history of leptospirosis vaccination were serologically evaluated through the microscopic agglutination technique (MAT) with a 13 serovars, belonging to ten different serogroups. There were 58 samples that were seropositive (65.90%), which included 28 samples seropositive for Pyrogenes (48.3%), 24 for Autumnalis (41.4%), 18 for Icterohaemorrhagiae (31.0%), and 16 for Grippotyphosa (27.6%). Even without clinical suspicion of leptospirosis or a history of vaccination, the horses showed different frequency of seropositivity. Considering the well-known impact of leptospirosis in human and animal health, our results are important to establish preventive measures to reduce the economic loss in equine production as well as a reduction in public health risk.

Keywords:
Leptospira spp.; horses; epidemiology; public health; Pará

1. Introdução

A leptospirose é uma doença bacteriana, zoonose que afeta mamíferos domésticos, silvestres e o homem(¹,²). Apresenta alta distribuição mundial e considerável impacto econômico e à saúde pública(³). Existem mais de 260 sorovares identificados, cada um com seu(s) hospedeiro(s) preferido(s) que podem abrigar um ou mais sorovares(⁴).

Leptospira spp. podem ser encontrados em diferentes contextos epidemiológicos, como urbano, rural e silvestre(⁵). Entre os mamíferos, os equinos podem desenvolver a doença de forma clínica ou assintomática; sua evolução pode ser uma doença aguda ou crônica(⁶), podendo ser observado sinais clínicos como febre, anorexia e dificuldade respiratória. Além disso, icterícia, hematúria, aborto espontâneo, natimorto/potros prematuros, uveíte e disfunção hepática e renal podem estar presentes(⁷,⁸).

Em equinos, a leptospirose é causada principalmente pelos sorovares Bratislava e Icterohaemorrhagiae(⁸), porém a prevalência pode variar de acordo com a região(⁹). Nesse sentido, em alguns estudos realizados no norte do Brasil foi observado a soroprevalência de outros sorovares como Australis, Autumnalis e Pyrogenes, além de Bratislava e Icterohaemorrhagiae(¹⁰-¹²). No entanto, no norte do Brasil, há poucos estudos sobre a atual prevalência de leptospirose em equinos. Portanto, nosso estudo teve como objetivo realizar um inquérito soroepidemiológico da leptospirose em equinos da região de Santarém-Pará, Norte do Brasil.

2. Material e métodos

As amostras deste estudo foram obtidas de 88 equinos criados em 15 propriedades rurais de Santarém-Pará, Norte do Brasil. As amostras de sangue foram coletadas por punção venosa usando tubos estéreis sem anticoagulante. Dos 88 animais, 51 eram machos e 37 fêmeas, com idade entre 2 e 16 anos, sem histórico recente de vacinação contra leptospirose. Amostras de soro foram testadas para anticorpos anti-Leptospira pelo teste de soroaglutinação microscópica (MAT)(¹³,¹⁴), usando antígenos vivos cultivados em meio líquido Ellinghausen-McCullough-Johnson-Harris livre de contaminação ou auto-aglutinação, conforme recomendado pela Organização Mundial da Saúde(¹⁵). A diluição de 1:100 foi usada como ponto de corte.

Um painel completo de 10 sorogrupos (incluindo 13 sorovares de referência) foi usado como antígeno de teste. Este painel incluiu: sorogrupo Sejroe (sorovar Hardjo [subtipo Hardjo-prajitno] e Wolffi), sorogrupo Grippotyphosa (sorovar Grippotyphosa), sorogrupo Canicola (sorovar Canicola), sorogrupo Icterohaemorrhagiae (sorovar Icterohaemorrhagiae e Copenhageni), sorogrupo Australis (sorovar Bratislava), sorogrupo Pomona (sorovar Pomona), sorogrupo Autumnalis (sorovar Butembo), sorogrupo Pyrogenes (sorovar Pyrogenes), sorogrupo Ballum (sorovar Ballum) e sorogrupo Tarassovi (sorovar Tarassovi).

Resumidamente, suspensões vivas de Leptospira spp. representando os 13 sorovares foram adicionadas à diluição em série das amostras de soro em uma placa de microtitulação (96 poços), incubadas à temperatura de 36 graus Celsius por 2 a 4 horas. A presença ou ausência de aglutinação foi determinada usando microscopia de campo escuro com aumento de 100x. Os títulos foram obtidos a partir da sequência de diluições e expressos como a maior diluição sérica que apresentou no mínimo 50% de aglutinação para Leptospira spp.(¹³,¹⁴).

Os dados foram registrados em planilhas Excel e posteriormente utilizados para análise descritiva dos dados por meio da utilização de tabelas de frequência. As médias foram comparadas por meio do teste qui-quadrado, com nível de significância estatística de 5% (P > 0,05). Os procedimentos experimentais foram aprovados pelo Comitê de Ética no Uso de Animais do Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Amazonas (Brasil), com o número de aprovação CEUA.008.02.1417.2404/2020.

3. Resultados

Das 88 amostras de soro, 58 (65,9%) foram soropositivas e 30 (34,1%) foram soronegativas. A soroprevalência para infecções únicas (considerando apenas 1 sorogrupo reagente) é apresentada na Tabela 1, e a Tabela 2 apresenta os resultados de infecções mistas, ou seja, soropositividade para mais de 1 sorogrupo.

Tabela 1
Soroprevalência de Leptospira spp. sorogrupos em infecções únicas (considerando apenas um sorogrupo) em amostras de soro equino de Santarém, Pará.

SOROGRUPO	SOROPOSITIVO (n)	SOROPOSITIVO (%)
Pyrogenes	28	48,3
Autumnalis	24	41,4
Icterohaemorrhagiae	18	31,0
Grippotyphosa	16	27,6
Ballum	13	22,4
Sejroe	12	20,7
Canicola	12	20,7
Tarassovi	9	15,5
Pomona	1	1,72
Australis	0	0

Tabela 2
Soroprevalência de Leptospira spp. sorogrupos em infecções mistas (considerando mais de um sorogrupo) em amostras de soro equino de Santarém, Pará.

SOROGROUPO	SOROPOSITIVO (n)	SOROPOSITIVO (%)
Pyrogenes	6	28,6
Autumnalis	10	47,6
Icterohaemorrhagiae	3 (todos pertencentes a sorovar Copenhageni)	14,3
Grippotyphosa	0	0
Ballum	0	0
Sejroe	1 (Hardjo)	4,76
Canicola	0	0
Tarassovi	1	4,76
Pomona	0	0
Australis	0	0

Nos resultados de infecção única (Tabela 1), observa-se que a soroprevalência incluiu o sorogrupo Pyrogenes [28 cavalos (48,3%)], seguido pelo sorogrupo Autumnalis [24 cavalos (41,4%)], Icterohaemorrhagiae [18 cavalos (31,0%) ], e Grippotyphosa [16 cavalos (27,6%)]. Da mesma forma para as infecções mistas, os sorogrupos para Pyrogenes, Atumunalis e Icterohaemorrhagiae foram predominantes e notadamente três cavalos (14,3%) foram soropositivos para o sorogrupo Icterohaemorrhagiae e sorovar Copenhageni. Não foram obtidas diferenças estatisticamente significativas quanto à infecção por sexo ou idade, com idade média de 8,5 anos.

4. Discussão

Nossos resultados demonstraram que 58 equinos (65,9%) foram soropositivos, indicando que esses animais tiveram contato direto ou indireto com Leptospira spp. Pesquisas realizadas na última década no Brasil mostraram uma variação considerável quanto à soroprevalência de leptospirose em equinos(⁹,¹²). A frequência observada neste estudo (65,9%) foi semelhante à encontrada em estudos realizados no Estado do Paraná (Brasil), onde relataram 66,88% de soropositividade(¹⁶). No entanto, outro inquérito realizado no Maranhão, região norte do Brasil, demonstrou 85% de frequência sorológica(⁶).

Foi observada maior soroprevalência para os sorogrupos Pyrogenes (48,3%) e Autumnalis (41,4%), o que difere do que geralmente é observado em estudos sorológicos de equinos no Brasil, onde é observada alta frequência dos sorogrupos Bratislava e Icterohaemorrhagiae(⁸). Em estudo realizado na Bahia, Nordeste do Brasil por Gomes et al.(¹⁷) também observaram maior prevalência do sorogrupo Pyrogenes (24,0%), demonstrando a importância deste sorogrupo em inquéritos sorológicos de equinos em diferentes regiões brasileiras. Moraes et al.(¹¹), no Pará, e Sousa et al.(¹²), no Amazonas, também observaram, assim como neste estudo, alta prevalência do sorogrupo Pyrogenes em equinos, o que pode sugerir a manutenção desse sorogrupo em alguns animais domésticos ou silvestres da região amazônica. No exterior, também foi identificado o sorogrupo Pyrogenes, com maior soroprevalência em cavalos da Suíça(¹⁸).

Dentro do sorogrupo Icterohaemorrhagiae, o sorovar Copenhageni apresentou predominância quando comparado ao sorovar Icterohaemorrhagiae, que geralmente não é o resultado mais frequentemente observado em equinos. No entanto, um estudo de Hamond et al.(⁸), no Rio de Janeiro, também relatou maior prevalência do sorovar Copenhageni em equinos. Na Holanda, Houwers et al.(¹⁹) também encontraram uma grande predominância do sorogrupo Icterohaemorrhagiae em cavalos, o que sugere que a soropositividade nesses animais não foi decorrente da vacina, mas sim de uma maior exposição aos sorovares, e os cavalos desenvolveram leptospirose subclínica. Considerando os problemas de saúde pública no Brasil, os sorovares Icterohaemorraghiae e Copenhageni estão relacionados aos casos mais graves de leptospirose em humanos(²⁰), com aproximadamente 1% dos pacientes desenvolvendo a forma mais grave e sendo fatal em 1-5% desses pacientes(²¹). Considerando que a infecção em humanos geralmente ocorre após contato direto ou indireto com a urina de um animal infectado(⁵), a alta prevalência do sorogrupo Icterohaemorrhagiae em nosso estudo pode requerer atenção como um problema de saúde pública.

Nossos resultados, para uma única infecção, mostraram que 16 cavalos (27,5%) eram soropositivos para o sorogrupo Grippotyphosa, que geralmente está relacionado à contaminação ambiental, pois esse grupo é abrigado por animais silvestres(²²) e acomete cavalos de forma incidental(²³). A reação sorológica para esse sorogrupo reforça a provável infecção em equinos pelo contato com animais silvestres, uma vez que a região onde foi realizado nosso estudo apresentava ambientes adequados para animais silvestres e condições favoráveis para a sobrevivência e disseminação do agente infeccioso.

A soropositividade para o sorovar Ballum foi observada em 13 amostras (22,4%), enquanto os sorogrupos Sejroe e Canicola tiveram 12 soropositivos (20,7%) cada. Os resultados de soroprevalência para o sorovar Ballum são menos frequentes, e raramente foram identificados como o sorovar mais prevalente em estudos com equinos(²⁴). No Brasil, há um estudo mostrando sua soroprevalência em 11,76% dos equinos do Rio Grande do Sul(²⁵). As infecções em equinos causadas pelos sorogrupos Sejroe ou Canicola não são consideradas comuns na América Latina(²⁶), mas a sororreatividade regional e internacional para esses sorogrupos foi relatada(²⁷-²⁹). Títulos elevados, com título igual ou superior a 400, correlacionam-se com infecção aguda por leptospirose em equinos; entretanto, títulos baixos de 100 a 200 podem representar uma infecção crônica devido à curva após a soroconversão, ou uma infecção aguda precoce com curva ascendente de anticorpos (soroconversão)(³⁰).

Vale ressaltar que existem fatores de risco da epidemiologia da leptospirose(²⁴) e que esses fatores de risco podem ser diferentes nas diversas regiões do Brasil. Devido ao amplo território do norte do Brasil e à grande diversidade animal desta região pode proporcionar condições particulares, principalmente quanto aos reservatórios e condições ambientais para manutenção de Leptospira spp.. Assim, é necessário estabelecer, avaliar, monitorar e atender a esses fatores de risco, bem como realizar estudos de campo nos reservatórios para poder fornecer medidas preventivas e, então reduzir os riscos a saúde como de equinos e de humanos.

5. Conclusão

Nosso estudo analisou equinos da região de Santarém-Pará, Brasil. Observou-se maior soroprevalência para os sorogrupos Pyrogenes e Autumnalis, diferente da sorologia geralmente observada em equinos no Brasil. Considerando a peculiaridade ambiental do norte do Brasil, os resultados podem ocorrer devido à manutenção desses sorogrupos por alguns animais domésticos ou silvestres da região amazônica.

Agradecimentos

Agradecemos à Pró-Reitoria de Pesquisa, Pós-Graduação e Inovação Tecnológica do Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Amazonas (IFAM). O financiamento para a realização do estudo foi fornecido pelo IFAM por meio do Programa de Apoio ao Desenvolvimento Científico e à Inovação Tecnológica (PADCIT) - Edital nº 001/2019-PPGI/IFAM e Edital nº 001/2018/PR-PPGI/IFAM.

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Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  26 Jun 2023
• Data do Fascículo
  2023

Histórico

• Recebido
  17 Dez 2022
• Aceito
  27 Fev 2023
• Publicado
  04 Maio 2023