ISOLAMENTO DE SALMONELLA: COMPARAÇÃO DAS ETAPAS DE PRÉ- ENRIQUECIMENTO E ENRIQUECIMENTO DIRETO DE AMOSTRAS DE FEZES ARMAZENADAS POR 24 E 96 HORAS

ISOLATION OF SALMONELLA FROM POULTRY FECES: A COMPARISON OF PREENRICHIMENT AND DIRECT ENRICHMENT

RESUMO

Este trabalho foi desenvolvido para avaliar comparativamente o isolamento de Salmonella sorotipos Enteritidis (SE) e Typhimurium (STM) a partir do enriquecimento direto (ED) ou processamento com pré-enriquecimento (PE) de amostras de fezes de aves adultas, armazenadas em água peptonada tamponada a 1% (APT) por 24 ou 96h a 4º C. Utilizou-se os caldos de enriquecimento Rapapport-Vassiliadis novobiocina (RVN), tetrationato-novobiocina (TN) e selenitonovobiocina (SN) e os meios para plaqueamento ágar verde brilhante (VB), ágar de MacConkey (MC), ágar de Hektoen (HE), ágar Salmonella-Shigella (SS), ágar xilose lisina desoxicolato (XLD) e ágar xilose lisina tergitol 4 (XLT4). O procedimento bacteriológico incluiu as etapas de pré-enriquecimento, enriquecimento em caldo seletivo, plaqueamento, testes bioquímicos presuntivos e confirmação sorológica com utilização de soros polivalentes anti-antígenos somáticos e anti-antígenos flagelares de Salmonella. Não houve diferença estatisticamente significativa (p > 0,05) para as amostras armazenadas por 24h submetidas tanto ao PE quanto ao ED. Entretanto, em armazenagem por 96h o número de isolamentos nas amostras submetidas ao PE foi estatisticamente superior às submetidas ao ED (p < 0,05). Quanto aos caldos enriquecedores, não houve diferença estatística de número de isolamentos (p > 0,05) entre os caldos SN e TN, mas o caldo RVN mostrou-se estatisticamente superior aos demais (p < 0,05). Para os meios de plaqueamento, o XLD destacou-se por promover maior número de recuperações, embora sem significado estatístico (p > 0,05) para as amostras estocadas por 24h. Entre os dois sorotipos de Salmonella (SE e STM) não houve diferença estatística no número de recuperações (p > 0,05).

PALAVRAS-CHAVE
Fezes de aves; enriquecimento seletivo; comparação de meios; procedimento bacteriológico

ABSTRACT

This work was carried out to assess the preenrichment (PE) and enrichment (DE) steps for isolating Salmonella serotypes Enteritidis (SE) and Typhimurium (STM) from chicken feces kept at 4° C for 24 and 96h. The samples were artificially contaminated and kept in 1% peptone water at 4° C for 24 or 96h. After that, part of them was incubated at 37° C/24h and part was inoculated into enrichment broth, selenite broth plus novobiocin (SN) and tetrathionate broth plus novobiocin (TN) incubated at 37°C/24h. The PE culture was inoculated in SN, TN and Rapapport-Vassiliadis novobiocin (RVN), also incubated at 37° C/24h. The enrichment broth was plated on brilliant green agar (BGA), MacConkey agar (MCA), Hektoen agar (HEA), Salmonella-Shigella agar (SSA), xylose-lysine desoxicholate agar (XLDA) and xylose-lysine tergitol 4 (XLT4), which were incubated at 37° C/24h. Salmonella-like colonies were submitted to TSI agar and LIA agar, and incubated at 37° C/24h, as well as to slide agglutination tested with poly O and poly H Salmonella antiserum. When the samples were stored for 24h there was no difference between PE and DE (p > 0.05). However after 96h the PE was superior to DE (p < 0.05). For enrichment, better results were seen with RVN broth (p < 0.05). The XLD yielded

KEY WORDS
Salmonella isolation; chicken feces; pre-enrichment; enrichment

INTRODUÇÃO

O intenso crescimento e desenvolvimento do setor avícola, nas últimas décadas, tornou-o rentável, produtivo e competitivo. Contudo, o sistema intensivo de criação e abate precoce de frangos, favorece a presença de Salmonella no produto final (BERCHIERI JUNIOR et al., 1987; BERCHIERI JUNIOR et al., 1989). Entre os mais de 2.500 sorotipos de Salmonella, alguns podem infectar as aves causando ou não o paratifo aviário e, através de produtos alimentícios de origem avícola, estarem envolvidos em toxinfecções alimentares em seres humanos (BERCHIERI JUNIOR, 2000; VAN IMMERSEEL et al. 2005). Segundo BARROW (2000), as salmonelas continuam sendo a maior causa de toxinfecção alimentar humana, e devido a sua habilidade de colonizar o trato entérico das galinhas, aumenta o risco de contaminação da carcaça e de ovos. Na década de 80, houve um aumento expressivo nos casos de toxinfecções alimentares associadas a salmonelas na Europa, América do Norte e do Sul (RODRIGUE et al., 1990), fato que culminou com a intensificação de pesquisas sobre salmoneloses em animais e seres humanos (BARROW, 1993). No Brasil também houve um significativo aumento nos casos de contaminação de humanos, destacando-se a Salmonella Enteritidis entre os sorotipos mais isolados (FERNANDES et al., 2003; TAVECHIO et al., 1996) também em aves (BERCHIERI JUNIOR, 2000; KANASHIRO, 2005).

Tendo-se em vista a participação de aves no contágio de humanos, foi criado o Programa Nacional de Sanidade Avícola (PNSA) pelo Ministério da Agricultura (Portaria nº 193), com adoção de normas (Portaria nº 8) para prevenir e controlar a presença de Salmonella em aves (BRASIL, 1994; BRASIL, 1995).

As etapas necessárias para o isolamento e identificação de espécimes do gênero Salmonella seguem uma seqüência que inclui as etapas de pré-enriquecimento, enriquecimento direto (seletivo), plaqueamento em meios semi-sólidos, análise bioquímica e tipificação sorológica (LITCHFIELD, 1973). O enriquecimento e o plaqueamento são as etapas com maior número de possibilidades de meios de cultivos (FLOWERS et al., 1992; WRAY & DAVIES, 1994; WALTMAN & MALLINSON, 1995), pois estes devem auxiliar no desenvolvimento e recuperação da bactéria ao mesmo tempo em que devem impedir o desenvolvimento de microrganismos competidores. A falta de resultados conclusivos propicia ampla discussão e reformulação de meios consagrados, assim como surgimento de novos produtos.

O pré-enriquecimento (PE) é utilizado para análise de material desidratado para favorecer a recuperação de organismos deprimidos ou danificados. Dessa forma, a incubação inicial das amostras em meio não seletivo (PE) permite a recuperação de células debilitadas antes de sua inoculação em meios seletivos. A maioria dos protocolos indica que o tempo mínimo de incubação em meios de PE deve ser de 16 horas a 37º C (D’AOUST & MAISHMENT, 1997; MOHR et al., 1974). Após a incubação, via de regra, 1 mL do caldo préenriquecedor é transferido para 10 mL de caldo seletivo, com exceção do caldo Rappaport-Vassilidis, para o qual deve-se transferir 0,1 mL em 10 mL do caldo.

TATE et al. (1990) compararam o isolamento de Salmonella com e sem o PE em amostras de ambientes de granjas. Com enriquecimento direto em caldo tetrationato, 73% das amostras foram positivas para Salmonella, enquanto 77% das amostras foram positivas quando o PE era empregado antes do enriquecimento em caldo tetrationato.

WALTMAN (1998), cita 3 famílias de meios de enriquecimento seletivo: caldo selenito (EN), caldo tetrationato (TN) e caldo Rapapport-Vassiliadis (RV), acrescidos ou não de novobiocina. Segundo PESSOA & PEIXOTO (1971) a adição de novobiocina ao caldo selenito favorece o isolamento de Salmonella em ao maior número de tentativas para uma amostra.

O caldo de enriquecimento RV é um meio de alta seletividade, razão pela qual seu emprego é restrito a amostras submetidas primeiramente ao PE. Este meio foi inicialmente formulado para isolamento de Salmonella em fezes, mas estudos posteriores atestaram sua eficiência para isolar Salmonella a partir de outros tipos de materiais.

Assim como para os caldos de enriquecimento seletivo, diversas sugestões de conteúdo são feitas para os meios semi-sólidos. Alguns trabalhos ressalvam que não é possível estabelecer qual seria o meio de plaqueamento ideal (MCCARTH, 1966; SHERROD etal., 1995; YUNO et al., 1995; PETERSEN, 1997). COX et al. (1972) e NASCIMENTO et al. (2000) indicaram o uso do ágar verde brilhante (VB) para o isolamento de Salmonella de fezes de aves e alimentos de origem avícola. HU & GIBBS (1995) evidenciaram a eficiência do ágar VB para o isolamento de Salmonella em amostras de fezes. Destacou-se o uso do ágar xilose-lisina desoxicolato (XLD) para isolamento de Salmonella a partir de amostras de carne (REISSBRODT et al., 1996; ALVEIKE & SKEJERVE, 2000) e em fezes (HU & GIBBS, 1995). REISSBRODT et al, (1996), WIBERG & NORBERG (1996), HARA-KUDO et al., (2001) indicam o uso do ágar xilose-lisina tergitol 4 (XLT4) para o isolamento de Salmonella de fezes, segundo MILLER et al. (1991) e MILLER et al. (1994) este meio é exclusivo para Salmonella, conseguindo evitar a presença de competidores, especialmente Proteus sp.

Da mesma forma que para os caldos de enriquecimento seletivo, melhores resultados advém da combinação de dois ou mais meios de plaqueamento, (FERNANDES et al., 2003; TAYLOR & SILLIKER 1961; BERCHIERI JUNIOR. et al., 1986; NASCIMENTO et al., 2000).

Geralmente, a pesquisa de Salmonella em amostras de fezes, inicia-se pelo enriquecimento seletivo ou até mesmo pelo plaqueamento direto em ágar seletivo. Contudo, o exame de amostras colhidas em granjas, nem sempre pode ser realizado em 24h. Assim sendo, o presente trabalho propõe-se a investigar o efeito da armazenagem de amostras de fezes de aves adultas, contaminadas experimentalmente com Salmonella Enteritidis e Salmonella Typhimurium, conservadas a 4º C em água peptonada tamponada a 1% (APT) por 24 e 96h e levadas a processo de enriquecimento direto em caldos seletivos comparativamente com o processamento a partir do pré-enriquecimento em APT, conforme estabelece o PNSA (BRASIL, 1995). O enriquecimento foi realizado com os caldos selenitonovobiocina (SN), tetrationato-novobiocina (TN) e Rapapport-Vassiliadis-novobiocina (RVN) e o plaqueamento, com meios de ágar verde brilhante (VB), MacConkey (MC), Hektoen (HE), Salmonella Shigella (SS), ágar xilose lisina desoxycolato (XLD) e xilose lisina tergitol 4 (XLT4).

MATERIAL E MÉTODOS

Preparo das amostras experimentalmente contaminadas por Salmonella

Para a realização do trabalho, utilizou-se fezes de aves adultas do aviário da FCAV-Unesp, Jaboticabal, SP, e de uma granja comercial localizada na região de Campinas, SP. As fezes provenientes da FCAV-Unesp foram processadas no laboratório de Ornitopalogia da FCAV-Unesp, Jaboticabal, SP e da região de Campinas pelo LANAGRO – Campinas-SP, setor aviárias. As fezes foram contaminadas experimentalmente com cepas de Salmonella, sorotipos Enteritidis e Typhimurium.

As culturas foram preparadas em caldo nutriente, com incubação a 37º C/24h sob agitação constante. A seguir, procedeu-se a contagem de células viáveis de Salmonella, diluindo-as decimalmente em PBS pH 7,4. De cada diluição, transferiu-se 0,1 mL para placas contendo ágar verde brilhante, que foram incubadas a 37º C/24h, obtendo-se o número de unidades formadoras de colônia por mL. Com base nestes resultados, utilizou-se 2 mL da cultura diluída em caldo nutriente, contendo 1,1 x 10⁵ UFC/mL, que foram adicionados a 20 g de fezes (1,1 x 10⁴ UFC/g de fezes). Os testes para cada sorotipo foram realizados separadamente.

A colheita das amostras experimentalmente contaminadas foi realizada com 30 suabes de algodão estéreis, que foram passados nas fezes e colocados, em grupos de 5 unidades, em frascos contendo água peptonada tamponada a 1% (APT), atuando como meio de transporte. Três frascos foram acondionados a 4º C por 24h, e os outros três por 96h. Este procedimento foi repetido 2 vezes para cada sorotipo.

Procedimento microbiológico

De cada período de armazenagem, uma amostra foi pré-enriquecida em APT e incubada a 37º C/24h. As outras duas foram diretamente enriquecidas em caldo selenito-novobiocina (SN) e em caldo tetrationato-novobiocina (TN), que foram incubados a 37º C/24h. O pré-enriquecimento e o enriquecimento direto foram realizados respeitando a proporção de 1:10. Do crescimento em APT, transferiu-se 1mL para 10 mL de caldo SN, 1 mL para 10 mL de caldo TN e 0,1 mL para 10 mL de caldo Rappaport Vassiliadis Novobiocina (RVN), que foram incubados a 37º C/ 24h. A partir dos caldos de enriquecimento, foram semeadas placas contendo os meios ágar verde brilhante, ágar de MacConkey, Hektoen, SalmonellaShigella, ágar Xilose Lisina Desoxicolato (XLD) e Xilose Lisina Tergitol-4 (XLT-4). As placas foram incubadas a 37º C/24h. A confirmação daSalmonella foi realizada submetendo-se as colônias suspeitas a testes bioquímicos em tubos contendo ágar tríplice açúcar ferro inclinado (TSI) e ágar lisina ferro inclinado (LIA), que foram incubados a 37º C/24h. Confirmando-se a suspeita do gênero, as colônias foram submetidas ao teste rápido de aglutinação em lâmina, com soro polivalente anti-antígeno somático O e soro polivalente anti antígeno flagelar H de Salmonella.

Análise de Resultados

Para análise estatística dos dados utilizou-se o teste não paramétrico Qui-Quadrado (X²)(THRUSFIELD, 1995).

RESULTADOS

Na Tabela 1 estão dispostos os resultados do isolamento de Salmonella a partir dos caldos de enriquecimento utilizados, considerando-se o pré-enriquecimento (PE) e o enriquecimento direto (ED) das amostras armazenadas por 24 e 96h. Das 25 amostras armazenadas por 24h obteve-se isolamento em 13 delas com o ED contra 19 no processamento que utilizou PE. Estes dados não diferem estatisticamente entre si (p > 0,05). Para as amostras armazenadas por 96h, das 25 amostras analisadas obteve-se isolamento positivo em 21 delas quando submetidas ao PE anteriormente ao enriquecimento, contra 11 no ED, diferença estatisticamente significativa (p < 0,05).

Tabela 1
Isolamento de Salmonella de fezes de aves adultas contaminadas experimentalmente, considerando-se o pré-enriquecimento (PE) e o enriquecimento direto (ED) de amostras conservadas em água peptonada tamponada (APT) por 24 e 96h a 4º C.

		No de amostrasarmazenadas
		24 horas			96 horas
PE	Enriquecimento	Positivas	%	Total	Positivas	%	Total
APT	SN	5	20	25	6	24	25
APT	TN	9	36	25	6	24	25
APT	RVN	17	68	25	18	72	25
	SN	8	32	25	7	28	25
	TN	11	44	25	11	44	25
APT	SN,TN, RVN	19	76	25	21	84	25
	SN,TN	13	52	25	11	44	25

• SN: caldo selenito-novobiocina, TN: caldo tetrationato-novobiocina, RVN, caldo rapapport-vasiliadis-novobiocina.

Nas amostras submetidas ao ED e armazenadas por 24 e 96h, o número de isolamentos no caldo TN e no caldo SN não diferiram estatisticamente entre si (p > 0,05) e, ainda, não se observou diferença estatisticamente significativa quando se comparou os resultados da associação de caldos com o uso do caldo TN ou do caldo SN isolados.

Nas amostras submetidas ao PE armazenadas por 24 e 96h, houve superioridade no número de isolamentos das amostras enriquecidas em caldo RVN quando comparadas aos caldos TN e SN (p < 0,05). Também se observou diferença estatisticamente significativa (p < 0,05) ao se comparar os resultados da associação dos caldos com o uso do caldo SN e caldo TN isoladamente. A análise da associação de caldos com o uso isolado do caldo RVN não mostrou diferença estatisticamente significativa (p > 0,05).

A Tabela 2 exibe os resultados referentes ao isolamento de Salmonella em fezes de aves, segundo os meios de plaqueamento utilizados. Para as amostras processadas após 24h de estocagem, os resultados apresentados não diferem estatisticamente entre si (p > 0,05). Notou-se superioridade numérica dos ágares XLD e SS em relação aos demais. Para as amostras processadas após 96 horas de estocagem, o ágar XLD apresentou-se estatisticamente superior aos demais (p < 0,05).

A Tabela 3 exibe as comparações entre o número de isolamentos de Salmonella Enteritidis e Salmonella Typhimurium. Não houve diferença estatisticamente significativa (p > 0,05) entre o número total de isolamentos dos dois sorotipos.

Tabela 2
Isolamento de Salmonella de fezes de aves adultas contaminadas experimentalmente, considerando-se os meios para plaqueamento das amostras conservadas em água peptonada tamponada (APT) por 24 e 96h a 4º C.

Meios para plaqueamento em ágar	Nº de amostras armazenadas
	24 horas			96 horas
	Positivas	%	Total	Positivas	%	Total
VB	11	44	25	19	76	25
MC	11	44	25	8	32	25
HE	5	33	15	8	53	15
SS	6	60	10	7	70	10
XLD	7	70	10	9	90	10
XLT4	8	53	15	7	46	15

• VB: ágar verde brilhante, MC: MacConkey, HE: Hektoen, SS: Salmonella-Shigella, XLD: xilose, lisina desoxicolato, XLT4: xilose lisina tergitol 4.

Tabela 3
Isolamento de Salmonella Enteritidis (SE) e Salmonella Thyphimurium (STM) de fezes de aves adultas contaminadas experimentalmente, considerando-se o pré-enriquecimento (PE) e o enriquecimento direto (ED) de amostras conservadas em água peptonada tamponada (APT) por 24 e 96h a 4º C.

Início sequência	Serovar	No de amostras armazenadas
		24 horas			96 horas
		Positivas	%	Total	Positivas	%	Total
PE	SE	14	70	20	16	80	20
PE	STM	5	100	5	5	100	5
ED	SE	8	66	20	6	30	20
ED	STM	5	100	5	5	100	5
PE+ED	SE	14	70	20	19	95	20
PE+ED	STM	5	100	5	5	100	5

DISCUSSÃO

Os dados referentes ao isolamento de Salmonella em fezes de aves armazenadas por 24h não mostraram diferença (p > 0,05) entre as etapas de ED e PE, embora haja superioridade numérica de isolamento nas amostras submetidas ao PE. Para as amostras armazenadas por 96h, os valores obtidos diferiram entre si (p < 0,05), sendo o número de isolamentos superior quando o procedimento iniciou-se com o PE. Comparando-se o número de isolamentos positivos entre 24 e 96h, estes não diferiram entre si (p < 0,05) quando as amostras armazenadas por 96h foram submetidas à etapa de PE. Estes dados assemelham-se aos observados por TATE et al. (1990), que obtiveram 73% de isolamento com amostras submetidas ao ED contra 77% de positividade para as submetidas ao PE, com 75% de isolamentos sem estocagem das amostras e 86% de isolamentos quando as amostras foram armazenadas.

Os valores relativos ao desempenho dos caldos enriquecedores SN e TN para o isolamento de Salmonella de fezes mostrou que os desempenhos individuais foram muito próximos, não apresentando diferença estatistica (p > 0,05). Estes resultados corroboram com aqueles descritos por TAYLOR & SILLIKER (1961), HUHTANEN & NAGSKI (1972) e NOGUEIRA & FRANCO (1995) os quais também não encontraram diferença estatística entre os isolamentos obtidos com os caldos. Sendo assim, não são condizentes aos resultados apresentados por FORWARD & RAINNIE (1997) e ALSEIKE & SKJERVE (2000) que consideraram o caldo selenito com rendimento superior na recuperação de Salmonella a partir de fezes. Quanto ao caldo RVN, este mostrouse superior aos demais (p < 0,05), provavelmente por se tratar de um meio de alta seletividade com uso restrito a amostras submetidas ao PE.

Conforme relatos anteriores (TAYLOR & SILLIKER 1961; BERCHIERI JUNIOR et al., 1986; WALTMAN, 1998; SMYSER & SNOYENBOS, 1969; FERNANDES et al., 2003; NASCIMENTO et al., 2000), também foi evidente neste trabalho, que os melhores resultados advém da combinação de caldos.

A análise dos resultados relativos aos meios de plaqueamento possibilitou evidenciar nas amostras armazenadas por 24h, a superioridade numérica sem significado estatístico do ágar XLD e do ágar SS, os quais permitiram o isolamento positivo em 70% e 60%, das amostras, respectivamente, à semelhança dos resultados encontrados por NASCIMENTO et al. (2000). Para as amostras armazenadas por 96 horas a superioridade do ágar XLD em relação aos demais foi estatisticamente significativa (p < 0,05). Da mesma forma que para os caldos de enriquecimento, a utilização de vários meios de plaqueamento permitiu maior número de isolamentos, por aumentar a possibilidade de recuperação.

Não houve diferença estatísticamente significativa (p > 0,05) entre a recuperação dos sorotipos (S. Enteritidis e S. Typhimurium) concordando com ARROYO & ARROYO (1995), os quais afirmam que o isolamento de Salmonella independe do sorotipo inoculado e do meio utilizado, e que este depende da concentração de Salmonella na amostra e da competição desta com outras bactérias.

Os resultados deste trabalho demonstram que a etapa de pré-enriquecimento de amostras de fezes estocadas por 96h favorecem o isolamento de Salmonella. Permitem ainda, vislumbrar a dificuldade em se definir qual o melhor caldo de enriquecimento e meio de plaqueamento para o isolamento de Salmonella, reforçando dessa forma a idéia de que o melhor a se proceder é a associação de dois ou mais caldos de enriquecimento e meios de plaqueamento.

AGRADECIMENTOS

Ao Sr. Antônio José dos Santos e Sra. Aparecida Rodrigues Baptista pelo auxílio técnico laboratorial e ao CNPq e FAPESP pelo apoio financeiro e bolsas de IC.

REFERÊNCIAS

• ALBUQUERQUE, R.; ITO, N.M.K.; MIYAJI, C.I. Estudo comparativo de diferentes meios de cultura para o isolamento de salmonelas em matérias-primas e rações. Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science, v.37, n.1, 2000.
• ALSEIKE, O. & SKEJERVE, E. Probability of detection of Salmonella using different analytical procedures with emphasis on subespecies diarizone serovar 61: k: 1,5 (7). International Journal of Food Microbiology, v.58, p.49-58, 2000.
• US. EPA. Sewage Sludge Regulations Part503-Standard for the use or disposal of sewage sludge. USEPA, 1992.
• ARROYO, G.; ARROYO, J.A. Efficiency of different enrichment and isolation procedures for the detection of Salmonella serotypos in edible offal. Journal of Applied Bacteriology, v.79, n.4, p.360-367, 1995
• BARROW, P.A. Salmonella-present, past and future. Avian Pathology, v.22, p. 651-659, 1993.
• BARROW, P.A. The paratyphoid Salmonellae Review Science Technology, v.19, p.351-375, 2000.
• BERCHIERI JUNIOR, A.; IRINO, K.; PAULILLO NEME, S.N.; PAULILLO, A.C.; CALZADA, C.T.; FERNANDES, S.A.; PESSOA, G.V.A. Contaminação por Salmonella em farinha de origem animal utilizadas no preparo de rações. Pesquisa Veterinária Brasileira, v.4, p.83-88, 1984.
• BERCHIERI JUNIOR, A.; IRINO, K.; PAULILLO, A.C.; NEME, S.N.; FERNANDES, S.A.; KRONKA, S.N.; PESSOA, G.V.A. Eficácia dos caldos selenito-novobiocina e tetrationato-novobiocina na pesquisa de Salmonella em farinha de carne. Pesquisa Veterinária Brasileira, v.6, p.133-136, 1986.
• BERCHIERI JUNIOR, A.; PAULILLO, A.C.; ROSSI JR, O.D.; IRINO, K.; FERNANDES, S.A.; ÁVILA, F.A.; PESSOA, G.V.A.; CAZADA, C.T. Salmonella em abatedouro avícola. Ars Veterinária, v.3, p.81-87, 1987.
• BERCHIERI JUNIOR, A.; ADACHI, S.Y.; CALZADA, C.T.; PAULILLO, A.C.; SCHOKEN-ITURRINO, R.P.; TAVECHIO, A.T. Farinhade carne como fonte de Salmonella em granja avícola. Pesquisa Veterinária Brasileira, v.9, p.9-12, 1989.
• BERCHIERI JUNOR, A. Enfermidade das aves. In: BERCHIERI JUNIOR, A. & MACARI , M. Doenças das aves Campinas: FACTA, 2000. p.183-253.
• BLIVET, D.; SALVAT, G.; HUMBERT, F.; COLIN, P. Evaluation of a new enrichment broth for isolation of Salmonella spp from poultry products. International Journal of Food Microbiology, v.38, p.211-216, 1997.
• BRASIL. Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. Programa Nacional de Sanidade avícola: Atos Legais. Portaria nº 193 de 19 de setembro de 1994: Institui o Programa Nacional de Sanidade Avícola, no âmbito da DAS e cria o Comitê Consultivo do Programa de Sanidade Avícola. Brasília, 1994. p.2-3
• BRASIL. Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. Programa Nacional de Sanidade avícola: Atos Legais. Portaria nº 8 de 23 de janeiro de 1995: Estabelece o Método Analítico de Carcaças de aves e Pesquisa de Salmonella Brasília, 1995. p.60.
• CARRINGTON, E.G. The isolation and identification of Salmonella spp. in sewage sludges: acomparasionofmethodsandrecommendations for a standard technique. Cambridge: Water Resources Centre, 1980. (Technical Report, TR 129).
• COX, N.A.; DAVIS, B.H.; KENDALL, J.H.; WATTS, A.B.; COLMER, A.R. Salmonella in the laying hens. A comparison of various enrichment broths and plating media for the isolation of Salmonella from poultry feces and poultry food products. Poultry Science, v.51, n.4, p.1312-1316, 1972.
• D’AOUST, J.Y. & MAISHMENT, C. Pre-enrichment conditions for effective recovery of Salmonella in foods and feed ingredients. Journal of Food Protection, v.42, p.153-157, 1997.
• FERNANDES, S.A.; GHILIARDI, A.C.; TAVECHIO, A.T.; MACHADO, A.M.; PIGNATARI, A.C. Phenotypic and molecular characterization of Salmonella Enteritidis strains isolated en São Paulo, Brazil. Revista do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo, v.45, n.2, p.54-63, 2003.
• FLOWERS, R.S.; D’ AOUST, J.Y.; ANDREWS, W.H.; BAILEY, J.S. Salmonella In: American Public Health Association. Compendium of methods for the microbiological examination of foods 3.ed. Washington: APHA, 1992. p.371-421.
• FORWARD, K.R. & RAINNIE, B.J. Use of selenite enrichment broth for the detection of Salmonella from stool: a report of one year experience at a provincial public health laboratory. Diagnostic Microbiology Infection Diseases, v.29, p.215-217, 1997.
• HARA-KUDO, Y.; KUMAGAI , S.; MASUDA, T.; GOTO, K.; OHTSUDA, K.; MASAKI, H.; TANAKA, H.; TANNO, K.; MIYAHARA, M.; KONUMA, H. Detection os Salmonella Enteritidis in shell and liquid eggs using enrichment and plating. International Journal of Food Microbiology, v.64, p.395-399, 2001.
• HNSON , R.A. Improved selective procedure for detection of Salmonella from poultry and sausage products. Journal Food Protect, v.51, p.391-396, 1998.
• HU, J.C. & GIBBS, R.A. A comparison of culture methods for the detection of Salmonella in wasterwater sludge. Science and Technology, v.31, p.303-306, 1995.
• HUHTANEN, C.N. & NAGHSKI, J. Effect of type of enrichment and duration of incubation on Salmonella recovery from meat-and-bone meal. Applied Microbiology, v.23, p.578-585, 1972.
• KANASHIRO, A.M.I. Serovars of Salmonella spp. Isolated from broiler chickens and commercial breeders in diverse regions in Brazil from July 1997 to December 2004. Brazilian Journal Poultry Science, p.195-197, 2005.
• LITCHFIELD, J.H. Salmonella and the food industry: methods for isolation, identification and enumeration. Critical Reviews in Food Technology, v.3, p.415-456, 1973.
• MCCARTHY, M.D. The use of XLD agar as a medium for isolation of intestinal pathogens. New Zealand Journal Medicine Laboratory Technologyc, v.20, p.344-349, 1966.
• MILLER, R.G.; TATE, C.R.; MALLINSON , E.T.; SCHERRER, J.A. Xylose-Lisine-Tergitol 4: an improved agar medium for the isolation of Salmonella Poultry Science, v.70, p.2429-2432, 1991.
• MILLER, R.G.; TATE, C.R.; MALLINSON , E.T. Improved XLT4 agar: small addition of peptone to the promote stronger production of hydrogen-sulfide by Salmonella Journal of Food Protection, v.57, p.854-858, 1994.
• MOHR, H.K.; TRENK, H.L.; YETERIAN, M. Comparison of fluorescent-antibody methods and enrichment serology for detection of Salmonella. Applied Microbiology, v.20, p.273-275, 1974.
• NASCIMENTO, M.S.; BERCHIERI JUNIOR, A.; BARBOSA, M.D.; ZANCAN, F.T.; ALMEIDA, W.A.F. Comparison of different enrichment broth and plating media used to isolation Salmonella from chicken carcasses and poultry faeces samples. Brazilian Journal of Poultry Science, v.2, p.85-91, 2000.
• NOGUEIRA, B.T.C.P. & FRANCO, B.D.G.M. Recovery of acid Salmonellae from artificially contaminated mayonnaise. Revista de Microbiologia, v.26, p. 28-31, 1995.
• PESSOA, G.V.A. & PEIXOTO, E.S. Caldo selenito-novobiocina um meio de maior seletividade para o isolamento de Salmonella de fezes. Revista do Instituto Adolfo Lutz, v.31, p.1-3, 1971.
• PETERSEN, L. A comparison of EF-18 and modified brilliant green agar with lutensit for isolation Salmonella from poultry samples. Acta Veterinaria Scandinavica, v.38, p.79-85, 1997.
• REISSBRODT, R.; VIELITZ, E.; KORMANN, E.; RABSCH, W.; KUHN, H. Ferrioxamine E-supplemented pre-enrichment and enrichment media improve various isolation methods for Salmonella. International Journal of Food Microbiology, v.29, p.81-91, 1996.
• RODRIGUE, D.C.; TAUXE, R.V.; ROWE, B. International increase in Salmonella Enteritidis phage typt 4: a new pandemic? Epidemiology and Infection, v.105, p.21-27, 1990.
• SHERROD, P.S.; AMAGUANA, R.M.; ANDREWS, W.H.; JUNE, G.A.; HAMMACK, T.S. Relative effectiveness of selective plating agars for recovery of Salmonella sp. from selected high-moisture foods. Journal of AOAC International, v.78, p.670-690, 1995.
• SMYSER, C.F. & SNOYENBOS, G.H. Evaluation of several methods of isolating Salmonellae from poultry litter and animal feedstuffs. Avian Diseases, v.13, n.1, p.133-141, 1969.
• SMYSER, C.F. & SNOYENBOS, G.H. Enrichment serology compared with a direct-culture procedure for isolating Salmonella from rendered animal by-products. Avian Diseases, v.15, p.581-587, 1971.
• TATE, C.R.; MILLER, R.G.; MALLINSON , E.T.; DOUGLASS, L.W.; JOHNSTON , R.W. Theisolationof S almonella from poultry environmental samples by several enrichment procedures using plating media with and without novobiocin. Poultry Science, v.69, n.5, p.721-726, 1990.
• TAVECHIO, A.T.; FERNANDES, S.A.; NEVES, B.C.; DIAS, A.M.; IRINO, K. Changing patterns of Salmonella serovars: increase of Salmonella Enteritidis in São Paulo, Brazil. Revista do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo, v.38, n.5, p. 315-322, 1996.
• TAYLOR , W.I. & SILLIKER, J.H. Isolation of Salmonella from samples IV. Comparison of methods of enrichment. Applied Microbiology, v.9, p.484-486, 1961.
• THRUSFIELD, M. Veterinary Epidemiology Cambridge: Blakweel Science, 1995. p.479.
• VAN IMMEERSEL, F.; METHNER, U.; RYCHLIK, L.; NAGY, B.; VELGE, P.; MARTIN, G.; FOSTER, N.; DUCATELLE, R.; BARROW, P.A. Vaccination and early protection against non-hostspecific Salmonella serotypes en poultry: exploitation of innate immunity and microbial activity. Epidemioogy and Infection, p.1-20, 2005.
• WALTMAN , W.D.; MALLINSON E.T. Isolation of Salmonella from poultry tissue and enviromental samples: a nationwide survey. Avian Diseases, v.39, p.45-54, 1995.
• WALTMAN , W.D. Isolation of Salmonella from poultry environments. In: INTERNATIONAL SYMPOSIUM ON FOOD-BORNE SALMONELLA IN POULTRY, 1998, Baltimore, 1998, p.133-153.
• WILBERG, C. &; NORBERG, G.P. Comparasion between a cultural procedure using Rappaport-Vassiliadis broth and motility enrichments on modified semisolid Rappaport-Vassiliadis medium for Salmonella detection from food and feed. Journal Food Microbiology, v.29, p.353-360, 1996.
• WRAY, C.I.M. &; DAVIES, R.H. Guidelines on detection and monitoring of Salmonella infected poultry flocks with particular reference of S Enteritidis. Bulletin of the World Health Organization, v.173, p.1-48, 1994.
• YUNO, M.M.I.; TERZOLO,H.R.; FERNANDES, H.D.; MALENA, R.C.; AUTUNA, M.E. Evaluation of selective culture media for isolation of Salmonella from poultry. RevistaArgentina de Microbiologia, v.18, p.57-69, 1995.

Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  14 Jan 2022
• Data do Fascículo
  Jul-Sep 2006

Histórico

• Recebido
  06 Abr 2006
• Aceito
  15 Ago 2006