Cultura autóloga de células-tronco mesenquimais de tecido adiposo para o tratamento de rítides faciais

ARTIGO ORIGINAL

Cultura autóloga de células-tronco mesenquimais de tecido adiposo para o tratamento de rítides faciais

Autologous mesenchymal stem cells culture from adipose tissue for treatment of facial rhytids

César Claudio-da-Silva, TCBC-RJ^I; Leandra Santos Baptista^II; Rosana Bizon Vieira Carias^III; Hélio da Cunha Menezes Neto^III; Radovan Borojevic^II

^IProfessor Adjunto do Departamento de Cirurgia Geral, Serviço de Cirurgia Plástica, Hospital Universitário Clementino Fraga Filho, UFRJ, RJ - Brasil. Membro Titular da SBCP (Sociedade Brasileira de Cirurgia Plástica)

^IIPós-Doutorado, APABCAM, Hospital Universitário Clementino Fraga Filho, UFRJ, RJ - BR

^IIIGerente de Laboratório, Excellion Serviços Biomédicos S/A, RJ-BR

^IVProfessor Titular, Instituto de Ciências Biomédicas, UFRJ, RJ - BR

^{Endereço para correspondência}

RESUMO

OBJETIVO: Testar o efeito das c élulas tronco mesenquimais (CTM) de tecido adiposo no preenchimento cutâneo de rítides na região naso-labial.

MÉTODOS: Foram coletados 50 cc de gordura da região infra-umbilical e 20 mL de sangue periférico de 15 voluntárias do sexo feminino para obtenção das CTM e de plasma autólogo, respectivamente. As voluntárias foram agrupadas de acordo com as estratégias de injeções intra-dérmicas: grupo (1) somente o ácido hialurônico; grupo (2) somente as CTM; grupo (3) CTM associadas ao ácido hialurônico. Tratando-se de um estudo prospectivo e qualitativo o acompanhamento das voluntárias era mensal através de fotografias.

RESULTADOS: No grupo (1) foi observado um efeito de preenchimento imediato ao contrário do grupo (2) onde o efeito de preenchimento pleno foi alcançado aproximadamente após dois meses. No grupo (3) o preenchimento ocorreu de maneira mais efetiva e também progressiva, devido à combinação dos efeitos de curto e de longo prazo gerados pelo ácido hialurônico e pelas CTM, respectivamente.

CONCLUSÃO: As CTM quando associadas ao ácido hialurônico foram capazes de promover o preenchimento de sulcos profundos, com melhora progressiva do tônus da pele e diminuição das linhas de expressão.

Descritores: Células-tronco mesenquimais. Tecido adiposo.Rejuvenescimento.

ABSTRACT

OBJECTIVE: To test the effect of mesenchymal stem cells (MSC) from adipose tissue on the dermal filling for nasolabial rhytids correction.

MEHTODS: 50 cc of infraumbilical fat and 20 ml of peripheral blood were harvested to isolate MSC and autologous plasma from 15 female volunteers, respectively. The volunteers were grouped in according to the following strategies of intra-dermal injection: Group (I) only hyaluronic acid; Group (II) only MSC; Group (III) MSC combined with hyaluronic acid. For this qualitative and prospective study photographic monitoring was done monthly.

RESULTS: In the group (I) we observed an immediate effect of filling; in the group (II) the effect of filling was reached after approximately two months. In the group (III) filling occurred more efficiently and progressively, probably due to the combination of the short and long-term effects generated by the hyaluronic acid and MSC, respectively.

CONLCUSION: MSC when combined with hyaluronic acid were able to fill in deep folds, with progressive improvement of skin tone and decreasing lines of expression.

Key words: Mesenchimal stem cells. Adipose tissue. Rejuvenation.

INTRODUÇÃO

A literatura proporciona uma variedade de relatos com diferenças entre os graus de sucesso e falência do procedimento de lipoescultura. O sucesso do procedimento depende diretamente das técnicas de coleta, limpeza e reinjeção do material ¹. Porém ainda não existe um protocolo padrão que defina a melhor maneira de processamento da gordura, para um enxerto de longo prazo independente da área injetada ².

Muitos médicos acreditam que a sobrevivência dos adipócitos é um dos principais fatores que interferem diretamente no sucesso do enxerto³. Porém, a fração estromal do tecido adiposo é constituída de pré-adipócitos, células endoteliais, macrófagos, fibroblastos⁴ e também por células tronco mesenquimais (CTM), que quando apropriadamente estimuladas, dão origem a osso, cartilagem, e adipócitos ^5,6. Uma célula-tronco adulta é definida por várias propriedades, incluindo a sua habilidade de "auto-renovação". Quando uma célula-tronco é estimulada a se dividir, ela pode dar origem a células-filhas mais comprometidas a formar um tipo celular do tecido em que reside. Outras células filhas podem permanecer no estágio de células-tronco, podendo ainda se dividir inúmeras vezes⁷.

Estratégias regenerativas baseadas no uso de CTM do tecido adiposo são uma grande promessa para procedimentos médicos de aumento de tecidos moles, pois oferecem a possibilidade de um preenchimento em longo prazo⁸. Foi mostrado recentemente que a associação de CTM ao enxerto de gordura visando o aumento de seios promove resultados clínicos satisfatórios sem maiores complicações⁹.

Além do uso combinado a enxerto de tecidos, as CTM podem ser associadas a fatores de crescimento, e/ou a arcabouços (sintéticos ou biógenos), em um processo chamado de bioengenharia tecidual. O ácido hialurônico é um polissacarídeo importante, sendo o principal elemento da matriz extracelular dos tecidos fetais, e presente nos adultos como elemento estrutural na pele e tecido conjuntivo. Também promove migração e proliferação celular, e sua rápida substituição tecidual in vivo pelo colágeno, faz desse polissacarídeo um ótimo candidato para preenchimento de tecido mole¹⁰.

O estudo clínico aqui apresentado é baseado na utilização dos recursos da engenharia de tecidos, e envolve a criação de um implante autólogo de CTM associado ao ácido hialurônico para o preenchimento cutâneo de rítides na região naso-labial. Com esta combinação espera-se a formação de uma rede de matriz tridimensional in vivo. Sendo hidrofílica e permeável aos líquidos biológicos ricos em nutrientes, esta rede poderá propiciar um ambiente favorável para o crescimento celular e a produção da nova matriz extracelular, controlando a migração celular para outros locais.

MÉTODOS

Esse projeto foi aprovado na data de 20/07/2006, pelo Comitê de Ética em Pesquisa do Hospital Pró-Cardíaco (PROCEP), localizado na cidade do Rio de Janeiro - número da portaria: 170, tratando-se de um estudo prospectivo e qualitativo. No período de agosto a setembro de 2006 foram realizadas 15 coletas de gordura da região infra-umbilical em voluntárias do sexo feminino, obtendo-se 50 cc de aspirado. Também foram coletados 20 mL de sangue periférico para obtenção de plasma autólogo. Todas as voluntárias leram, concordaram e assinaram o termo de consentimento livre e esclarecido. A média e desvio padrão da idade das voluntárias foram de 45,8 ± 7,48; respectivamente.

Para a coleta do lipoaspirado procedia-se à assepsia e antissepsia seguida da infiltração de 50 cc de solução de lidocaína 0,25% com adrenalina 1:500.000 nos locais demarcados da região infra-umbilical. O material foi aspirado por meio de seringas com cânulas de 3 mm de diâmetro, que foram posteriormente seladas e colocadas em decantador por 30 min, para a remoção do conteúdo serossanguíneo. Ao tecido adiposo coletado foram adicionados 10 cc de solução antibiótica e o material foi transportado em ambiente refrigerado até a unidade de processamento.

Para a obtenção das CTM, o tecido adiposo foi processado como previamente descrito^5,6. As células foram cultivadas em meio de cultura Dulbecco's Modified Eagles Medium (DMEM; LGC, Cotia, SP) suplementado com 10% soro fetal bovino (Cultilab, Campinas, SP, e antibióticos (100 U/ml de penicilina sódica e 100 mg/mL de estreptomicina) e mantidas em estufa a 37ºC com 5% de CO₂ por até uma semana. Dois dias antes da aplicação, as células foram lavadas exaustivamente com solução fisiológica e mantidas em plasma autólogo para eliminação de proteínas fetais bovinas internalizadas¹¹.

No dia da aplicação, as células foram dissociadas com solução de tripsina 0,125% (Gibco BRL, Rockville, MD) e 0,78 mM de EDTA (Invitrogen, Gibco) e ressuspensas em soro fisiológico com ou sem ácido hialurônico (L.E.A, Paris, France) na concentração de 1:2 em um volume final de 0,6 mL. As voluntárias foram agrupadas aleatoriamente de acordo com as estratégias de aplicação: grupo (1) somente ácido hialurônico totalizando quatro pacientes; grupo (2) somente CTM de tecido adiposo totalizando seis pacientes; grupo (3) CTM de tecido adiposo associadas ao ácido hialurônico totalizando cinco pacientes (Tabela 1). Todas as aplicações foram realizadas nos sulcos nasogenianos.

Fotos da face foram capturadas no consultório médico com periodicidade mensal por até um ano. Trata-se, portanto, de um estudo qualitativo e prospectivo.

RESULTADOS

No Grupo (1) foi observado um efeito de preenchimento instantâneo (Figura 1A - D) e a estabilidade do implante variou individualmente, alcançando total reabsorção na voluntária 03, após 12 meses (Figura 1B).

No grupo (2) as CTM se mostraram capazes de gerar melhoras sutis no tônus da região naso-labial (figura 1E - H), mas não de preencher sulcos muito profundos (Figura 1E, F). No geral, o efeito do preenchimento se manteve por até 10 meses (Figura 1F, H).

No grupo (3) houve uma combinação do efeito imediato do ácido hialurônico com o efeito em longo prazo das CTM. Com isso, o preenchimento do sulco ocorreu de maneira efetiva, e ao invés da reabsorção progressiva observada no grupo (I), a região naso-labial apresentou melhora do tônus ao longo do tempo (Figura 1I - L). Não houve regressão da melhora em nenhuma das três voluntárias acompanhadas por até um ano (Figura 1J, L).

Não foram observados durante o estudo efeitos colaterais ou reações adversas que pudessem ser atribuídas ao agente de preenchimento e/ou CTM de tecido adiposo.

DISCUSSÃO

Existem vários tipos de agentes de preenchimento, de origem natural ou sintética, cada qual indicado para um determinado tipo de correção desejada. No caso do preenchimento cutâneo, os agentes mais utilizados são: colágeno, ácido hialurônico, ácido L poli-lático (PLLA), polimetilmetacrilato, e ainda alguns géis a base de hidroxiapatita de cálcio. Alguns materiais sintéticos por serem inertes, não são absorvidos, e por isso proporcionam um preenchimento da derme estável e duradouro. Porém algumas complicações devido a reações inflamatórias crônicas já foram relatadas. O polimetilmetacrilato é responsável por grande parte delas, as quais se apresentaram permanentes ou ainda sem respostas aos tratamentos¹².

O ácido hialurônico, utilizado neste estudo, é um polissacarídeo natural encontrado na matriz extracelular do tecido conjuntivo, do fluido sinovial e de outros tecidos. A segurança no seu uso advém da sua natureza biocompatível e tem como principal desvantagem sua reabsorção (6 - 12 meses). Uma das estratégias para aumentar sua durabilidade é o cross-linking da molécula que torna o hidrogel mais insolúvel e, por conseguinte menos reabsorvível ¹³. Outra estratégia já utilizada na prática clínica é a associação desse ácido com microesferas de dextranômero, uma molécula derivada da glicose, aparentemente estimuladora de síntese de colágeno. Porém, recentemente foi publicado um caso clínico de reação granulomatosa difusa no local de injeção do co-polímero de ácido hialurônico com dextranômero para correção de rítides¹⁴.

A base para protocolos de terapias celulares consiste no fato de que células saudáveis estimulam o tecido em que foram injetadas para o processo de regeneração¹⁵. Em preenchimento de rítides e cicatrizes de acne, diversos protocolos utilizando fibroblastos de pele autólogos já foram estabelecidos ^16-18. No caso de terapias celulares com células-tronco, além do efeito estimulatório de regeneração, ensaios clínicos relatam diferenciação das mesmas em células do tecido residente¹⁵. O tecido adiposo é uma fonte de CTM muito atraente para protocolos de terapias celulares, pois pode ser obtido em grandes quantidades em técnicas de lipoaspiração recorrentes⁴. Em 1999 foi realizado um estudo de preenchimento de rítides utilizando células estromais de tecido adiposo. Os resultados foram bem satisfatórios¹⁹, mas técnicas de aplicação de gordura total continuam a ser utilizadas ^1-3. Além disso, as CTM de tecido adiposo quando associadas aos enxertos de gordura, conferem maior durabilidade e um expressivo aumento do enxerto ⁹, sendo responsáveis pela produção de colágeno in situ, comprovada em modelo animal por análises histopatológicas²⁰.

No presente estudo as CTM de tecido adiposo foram utilizadas para o preenchimento de rítides faciais. As CTM quando associadas ao ácido hialurônico são capazes de preenchimento de sulcos profundos, com melhora progressiva do tônus da pele e diminuição das linhas de expressão, provendo a base para estratégias únicas de regeneração e reparo de tecido mole.

Recebido em 28/10/2008

Aceito para publicação em 30/12/2008

Conflito de interesse: nenhum

Fonte de financiamento: FAPERJ e CNPq

Trabalho realizado no Serviço de Cirurgia Plástica do Hospital Universitário Clementino Fraga Filho e na Excellion Serviços Biomédicos.

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Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  09 Nov 2009
• Data do Fascículo
  Ago 2009

Histórico

• Aceito
  30 Dez 2008
• Recebido
  28 Out 2008