Purificação e estudo de algumas propriedades do vírus da necrose branca do fumo

Silva, Darcy M.; Oliveira, Avelino R. de; Kitajima, Elliot W.; Carvalho, Ana Maria B.; Costa, A. S.

doi:10.1590/S0006-87051961000100033

Resumos

Experimentos relativos à purificação do vírus da necrose branca do fumo, em geral instável aos processos de purificação, mostraram ser possível obter preparações razoàvelmente homogêneas partindo-se de plantas por êle infetadas. O processo de purificação constou de uma clarificação preliminar através da adsorção de diversos componentes do suco de planta, ao qual foi adicionado dietilditiocarbamato de sódio a 0,1 M e tampão de fosfato pH 8,0 e a 0,1 M em fosfato hidradatado de cálcio, seguida de ultracentrifugações diferenciais. Os resultados das purificações a partir de Nicotiana tabacum L. var. xanthi, Solanum nigrum L. e Datura stramonium L. doentes, mostraram-se consistentes com respeito à presença de pellets após duas ultracentrifugações, o mesmo não acontecendo com as plantas contrôles. Tais preparações apresentaram infetuosidade até o terceiro dia após a extração do suco. Exames ao microscópio eletrônico das suspensões das pellets acima mencionadas em água destilada, mostraram a existência de partículas esferóides com um diâmetro ao redor de 50 milimicra. Injeções em coelho, via íntravenosa, num total de 7 doses de 2-3 ml de suspensão do vírus da necrose branca do fumo, preparadas diariamente pelo processo já referido, mas com uma só ultracentrifugação, provocaram a formação de anticorpos para o mesmo, conforme se pôde constatar pelos testes de precipitina de difusão em ágar.

This work presents the results of the purification of the Brazilian tobacco streak virus from material of different three host plant species. The procedure consisted of a preliminar clarification through the adsorption of several components of the juice from diseased plants extracted with phosphate buffer at pH 8,0, 0,1, M and sodium diethyl ditbio carbamate at 0,1 M on hidrated calcium phosphate and two or more ultracentrifugation cycles. Pellets were obtained from diseased Nicotiana tubacum L. var. xanthi Solanum nigrum L. and Datura stramonium and never from the healthy control plants after two ultracentrifugations. Suspension of such pellets in phosphate buffer and sodium diethyl ditio carbamate were infectious up to the third day after the juice extraction. The purified preparations when examined under electron microscope showed particles approximately spherical with a diameter around 50 mn. The preparations obtained after the clarification and one ultracentrifugation cycle when infected daily, intravenously, in one rabbit during 7 days promoted antibody formation to the Brazilian streak virus. The presence of antibody in the antiserum could be demonstrated in gel diffusion tests, but not in precipitin tests.

Engenheiros-agrônomos, Seção de Virologia, Instituto Agronômico

RESUMO

Experimentos relativos à purificação do vírus da necrose branca do fumo, em geral instável aos processos de purificação, mostraram ser possível obter preparações razoàvelmente homogêneas partindo-se de plantas por êle infetadas.

O processo de purificação constou de uma clarificação preliminar através da adsorção de diversos componentes do suco de planta, ao qual foi adicionado dietilditiocarbamato de sódio a 0,1 M e tampão de fosfato pH 8,0 e a 0,1 M em fosfato hidradatado de cálcio, seguida de ultracentrifugações diferenciais. Os resultados das purificações a partir de Nicotiana tabacum L. var. xanthi, Solanum nigrum L. e Datura stramonium L. doentes, mostraram-se consistentes com respeito à presença de pellets após duas ultracentrifugações, o mesmo não acontecendo com as plantas contrôles. Tais preparações apresentaram infetuosidade até o terceiro dia após a extração do suco.

Exames ao microscópio eletrônico das suspensões das pellets acima mencionadas em água destilada, mostraram a existência de partículas esferóides com um diâmetro ao redor de 50 milimicra.

Injeções em coelho, via íntravenosa, num total de 7 doses de 2-3 ml de suspensão do vírus da necrose branca do fumo, preparadas diariamente pelo processo já referido, mas com uma só ultracentrifugação, provocaram a formação de anticorpos para o mesmo, conforme se pôde constatar pelos testes de precipitina de difusão em ágar.

SUMMARY

This work presents the results of the purification of the Brazilian tobacco streak virus from material of different three host plant species.

The procedure consisted of a preliminar clarification through the adsorption of several components of the juice from diseased plants extracted with phosphate buffer at pH 8,0, 0,1, M and sodium diethyl ditbio carbamate at 0,1 M on hidrated calcium phosphate and two or more ultracentrifugation cycles.

Pellets were obtained from diseased Nicotiana tubacum L. var. xanthi Solanum nigrum L. and Datura stramonium and never from the healthy control plants after two ultracentrifugations. Suspension of such pellets in phosphate buffer and sodium diethyl ditio carbamate were infectious up to the third day after the juice extraction.

The purified preparations when examined under electron microscope showed particles approximately spherical with a diameter around 50 mn.

The preparations obtained after the clarification and one ultracentrifugation cycle when infected daily, intravenously, in one rabbit during 7 days promoted antibody formation to the Brazilian streak virus. The presence of antibody in the antiserum could be demonstrated in gel diffusion tests, but not in precipitin tests.

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Recebido para publicação em 22 de junho de 1961.

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