Resumo de Tese
Freqüência de Mutação no Códon 12 do Gene K-ras no Carcinoma Ductal Invasivo de Mama, Através da Técnica da Reação em Cadeia da Polimerase
Tese de Mestrado do Curso de Pós - Graduação da Faculdade de Ciências
Médicas da Santa Casa de São Paulo, apresentada em 14/05/98
Autor: Sônia Maria Rolim Rosa Lima
Orientador: Prof. Dr. Sebastião Piato
Introdução: Na carcinogênese mamária, ao lado de outras alterações gênicas, ocorre participação de oncogenes resultantes de mutações pontuais. O produto do proto-oncogene K-ras, a proteína Ras, localiza-se na face interna da membrana citoplasmática,tendo atuação central nos sinais de transdução do ciclo celular, na chamada cascata de fosforilação, responsável pela transmissão de sinais dos receptores tirosino-quinase ao núcleo. Quando ativado por mutação pontual, o oncogene resultante passa a dar origem a proteína Ras que sofre alterações em suas propriedades bioquímicas, perdendo a sua atividade GTAase normal, tornando-se permanentemente ligada à GTP. Como decorrência a proteína Ras permanece em sua configuração ativa, enviando sinais contínuos de transdução para o crescimento e diferenciação celular. Esta clonagem persistente caracteriza a fase de iniciação da carcinogênese.
Objetivo: Avaliar a freqüência de mutação no códon 12 do gene K-ras no carcinoma ductal invasivo de mama, através da técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR).
Material e Metodologia: Foram analisadas 50 amostras desparafinizadas de carcinoma ductal invasivo de mama, com 8m de espessura. De cada amostra foi feita a extração do DNA com emprego da proteinase K. A
amplificação de região específica de 157 pares de base, contendo o códon 12 do gene K-ras, foi realizada através de dupla PCR modificada por Levi e colaboradores, utilizando-se primers mismatches e análise do fragmento de comprimento variável, obtido através de clivagem por enzima de restrição Mva I. Graças a esta tecnologia obteve-se amplificação dos segmentos de pares de base normais e portadores de mutação. A constatação da presença ou não de mutação em cada amostra amplificada foi obtida através de eletroforese em gel de agarose a 0,8%, utilizando-se marcador de peso molecular Ladder 123 (IBCO-BRL). A documentação fotográfica dos resultados foi feita com a utilização de luz ultra-violeta transmitida, empregando-se filme Polaroid tipo 667(ASA 3000).
Resultados: Em cinco dos 50 carcinomas de mama estudados (10%), constatou-se a presença de mutação pontual no códon 12 do gene K-ras. Em todos os casos nos quais observou-se a referida mutação, as pacientes afetadas pelo carcinoma mamário encontravam-se na pós-menopausa. Em quatro dos casos o carcinoma mamário era moderadamente diferenciado (GII) e no restante era pouco diferenciado (GIII).
Palavras-chave: Oncogênese. Carcinogênese. Mama: câncer. Reação em Cadeia da Polimerase.
Datas de Publicação
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Publicação nesta coleção
09 Abr 2007 -
Data do Fascículo
Out 1998
