Caracterização e clonagem molecular da α-amilase secretada com atividade dominante de mon thong durian (Durio zibethinus Murr. cv. Mon Thong)

Resumo

A α-amilase secretada, com atividade dominante, foi purificada a partir do extrato bruto de Mon Thong durian através de passos de precipitação utilizando sulfato de amônia e cromatografia de afinidade. A α-amilase purificada (DzAmy1) tem uma massa molecular de aproximadamente 44 kDa. O pH e temperatura ótimos para a atividade foram 7.0 e 50°C, respectivamente. A enzima ficou estável no pH entre 6 a 10 e temperatura entre 30 a 60°C. Vários íons metais não afetaram a atividade amilásica. A clonagem do gene DzAmy1 foi feita e confirmou que esse gene consiste em 1.254 bp de região codificante, na qual se codificam 23 aminoácidos de peptídeo sinal e 395 aminoácidos da proteína madura com massa molecular calculada de 43.7 kDa. O ponto isoelétrico da enzima é de 5.78. A DzAmy1 pertence a subfamília das α-amilases de planta, de acordo com dados de filogenia. A caracterização estrutural através de modelagem por homologia sugeriu que a DzAmyl consiste em 3 domínios, com sua tríade catalítica presente no domínio A. A DzAmy1 recombinante (rDzAmy1) foi expressa em Escherichia coli com sucesso e teve sua atividade de hidrólise de amido e etilideno-pNP-G7, as quais claramente confirmaram a autenticidade da DzAmy1 como uma α-amilase funcional.

Termos para indexação
Durio zibethinus Murr. cv. Mon Thong; α-amilase segregada; caracterização; Escherichia coli