RESUMO:
A buva (Conyza bonariensis (L.) Cronq.) está entre as plantas daninhas resistentes ao glifosato mais difíceis de serem manejadas em todo o mundo. Na ciência das plantas daninhas, abordagens moleculares, como o sequenciamento de RNA (RNA-Seq) e a reação da transcriptase reversa da polimerase em tempo real (RT-qPCR), têm sido empregadas para estudar as respostas moleculares ao tratamento com glifosato em espécies de Conyza. No entanto, o tratamento com glifosato leva à produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) em plantas, que podem danificar o RNA. A degradação do RNA é um problema e pode comprometer futuras análises moleculares. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar se o tratamento com glifosato interfere negativamente na integridade do RNA de biótipos de buva resistente e sensível ao glifosato. Dois experimentos foram realizados utilizando doses de glifosato de 0 a 11.840 g e.a. ha-1 e avaliados em um tempo de até 288 horas após o tratamento. O total de 86 amostras de RNA foram avaliadas. A integridade do RNA foi avaliada em um equipamento Bioanalyzer 2100 de acordo com escores de número de integridade de RNA (RIN) e em gel de eletroforese. Os escores do RIN variaram de 5,1 a 9,0. Doses de glifosato não reduziram os escores do RIN em biótipos de buva resistentes e sensíveis ao glifosato. A análise visual e automática do gel de eletroforese mostrou resultados adequados para todas as amostras de RNA, com bandas bem definidas nas posições 28S e 18S e sem degradação. Os resultados da análise indicam que o tratamento com glifosato não afeta negativamente a integridade do RNA dos biótipos resistentes e sensíveis ao glifosato da buva até 288 e 192 horas após o tratamento com glifosato, respectivamente. A análise da integridade do RNA fornece resultados úteis. Entretanto, os custos são altos e ficaram em torno de US $ 14,25 por amostra, considerando apenas os reagentes. Esses resultados são úteis para o planejamento de experimentos futuros em Conyza spp. após o tratamento com glifosato.
Palavras-chaves:
buva; análises moleculares; número de integridade do RNA (RIN)
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The times 24 h, 96 h, 192 h, and 288 h indicate the hours after glyphosate treatment that leaves were collected to RNA extraction in each biotype. In each time, three biological replicates were used. Experiment 2. In this experiment were collected two completely expanded leaves from apex per plant for RNA extraction.
NS: non-significant at p≤0.05. Experiment 1 (E1).
NS: non-significant at p≤0.05. Experiment 2 (E2). B17S was evaluated until 192 HAT because after that time plants died.
(A) Experiment 1 (E1) - RNA extracted from B11R and B17S at 0, 12, 24, 48, and 96 hours after glyphosate treatment at 0 (untreated), 370, 1,480, 5,920, and 11,840 g a.e. ha-1. (B) Experiment 2 (E2) - RNA Samples 1-3: B11R untreated; RNA Samples 4-6: B17S untreated; RNA Samples 7-9: pooled RNA extracted from B11R at 24, 96, 192, and 288 hours after glyphosate treatment (1,480 g a.e. ha-1); RNA Samples 10-12: pooled RNA extracted from B17S at 24, 96, and 192 hours after glyphosate treatment (1,480 g a.e. ha-1). (C) Examples of degraded RNA - 1; and intact RNA - 2. HAT: hours after glyphosate treatment.
RNA extracted from B11R and B17S at 0, 12, 24, 48, and 96 hours after glyphosate treatment (HAT) at 0 (untreated), 370, 1,480, 5,920, and 11,840 g a.e. ha-1. Sam: indicate the sample number. The samples follow the same order of electrophoresis gel presented in Figure 4A.
RNA Samples 1-3: B11R untreated; RNA Samples 4-6: B17S untreated; RNA Samples 7-9: pooled RNA extracted from B11R at 24, 96, 192, and 288 hours after glyphosate treatment (1,480 g a.e. ha-1); RNA Samples 10-12: pooled RNA extracted from B17S at 24, 96, and 192 hours after glyphosate treatment (1,480 g a.e. ha-1). Sam: indicate the sample number. The samples follow the