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A Sensitive fluorescent assay for trypsin activity in biological samples using BSA-Au nanoclusters

Neste artigo, foi desenvolvido um novo método fluorométrico, simples, sensível e seletivo, para a medição de tripsina em amostras biológicas. O método foi baseado na medição da supressão da intensidade da fluorescência de agregados de nanopartículas de ouro estabilizados com albumina sérica bovina (BSA), pela proteólise enzimática. A curva de calibração para tripsina foi atingida no intervalo de concentração de 1-60 nmol L-1 com coeficiente de correlação 0,995 e um limite de detecção de 0,6 nmol L-1. O método foi também usado satisfatoriamente para avaliação da atividade da tripsina e os resultados mostraram que os valores das constantes de Michaelis-Menten (Km) e catalítica (Kcat), de tripsina para estes substratos de nanoagreagados BSA-Au, foram 1,6×10-5 mol L-1 e 3,8 s-1 a 37 ºC, respectivamente. Este biossensor enzimático é de interesse considerável devido à simplicidade do procedimento, e o método estabelecido tem grande potencial na detecção de outras proteases em diagnósticos clínicos de várias doenças.


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