<i>Validação da técnica de PCR multiplex para identificação de Brucella spp.</i>

Orzil, Lívia de Lima; Preis, Ingred Sales; Almeida, Iassudara Garcia de; Souza, Patrícia Gomes de; Soares Filho, Paulo Martins; Jacinto, Fabrício Barcelos; Fonseca Júnior, Antônio Augusto

doi:10.1590/0103-8478cr20150065

Acessibilidade / Reportar erro

Brasil
SciELO.org - Rede SciELO
Blog SciELO em Perspectiva

Abrir menu

Brasil

Español English

Ciência Rural

Submissão de manuscritos
Sobre o periódico
Corpo Editorial
Instruções aos autores
Contato

sumário « anterior atual seguinte »

Resumo (Inglês)
Resumo (Português)

Texto (Inglês)

Download PDF (Inglês)

Compartilhe

Compartilhe
E-mail
Facebook
Twitter
Google+
LinkedIn
Reddit
StambleUpon
CiteULike
Mendeley

Sumário

Compartilhe
E-mail
Facebook
Twitter
Google+
LinkedIn
Reddit
StambleUpon
CiteULike
Mendeley

Resumo (Inglês)
Resumo (Português)

Texto (Inglês)

Download PDF (Inglês)

MICROBIOLOGY • Cienc. Rural 46 (05) • Maio 2016 • https://doi.org/10.1590/0103-8478cr20150065 copiar

Validação da técnica de PCR multiplex para identificação de Brucella spp.

Autoria SCIMAGO INSTITUTIONS RANKINGS

RESUMO:

Validou-se neste trabalho uma técnica de PCR Multiplex (mPCR) para detecção deBrucella spp. em amostras de suspensão bacteriana, como ferramenta complementar no diagnóstico da doença. Esta técnica possibilita a caracterização do agente sem que seja necessária a realização de testes bioquímicos, o que diminui consideravelmente o tempo para o diagnóstico final, além de oferecer mais segurança ao analista ao diminuir o tempo de exposição ao agente infecioso. A validação foi realizada de acordo com o Manual de Testes de Diagnósticos da OIE (2008), seguindo as exigências presentes na norma de qualidade da ABNT NBR ISO/IEC 17025:2005. A mPCR validada neste trabalho identificou as diferentes espécies deBrucella (Brucella abortus , B. suis ,B. ovis eB. melitensis ) em suspensão bacteriana, obtidas a partir de amostras de frigorífico. Além disso, discriminou os biovares (1, 2 e 4; 3b, 5, 6 e 9) deB. abortus , de forma agrupada, e diferenciou cepa vacinal de cepa de campo, sendo esta uma técnica rápida, útil e de menor custo para o auxílio no diagnóstico de brucelose no Brasil.

Palavras-chave:
Brucelose; identificação molecular; zoonose; Brucella ; PCR multiplex

Autoria

Lívia de Lima Orzil

Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), Pedro Leopoldo, MG, Brasil. Ministério da Agricultura, Pecuária e AbastecimentoBrazilPedro Leopoldo, MG, BrazilMinistério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), Pedro Leopoldo, MG, Brasil.

Ingred Sales Preis

Iassudara Garcia de Almeida

Patrícia Gomes de Souza

Paulo Martins Soares Filho

Fabrício Barcelos Jacinto

Serviço de Inspeção Federal, Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), Pedro Leopoldo, MG, Brasil.Ministério da Agricultura, Pecuária e AbastecimentoBrazilPedro Leopoldo, MG, BrazilServiço de Inspeção Federal, Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), Pedro Leopoldo, MG, Brasil.

Antônio Augusto Fonseca Júnior^**Corresponding author: Antônio Augusto Fonseca Júnior, email: antonio.a.fonsecajr@gmail.com.

^*Corresponding author: Antônio Augusto Fonseca Júnior, email: antonio.a.fonsecajr@gmail.com.

SCIMAGO INSTITUTIONS RANKINGS

Figuras | Tabelas

Figuras (3)
Tabelas (3)

Thumbnail

Figure 1
1.5% agarose gel electrophoresis showing the different patterns for each species and biovars of B . abortus using the GoTaq enzyme. Markers at intervals of 100 base pairs. 1 to 7: B. abortus , samples used in repeatability test. 8: B. abortus biovar 1. This same profile is observed to B. abortus biovars 2 and 4; 9: B. abortus S19. 10: B. abortus biovar 1; 11: B. abortus biovar 3b. This same profile is observed to B. abortus biovars 5, 6 and 9; 12: B. melitensis and 13: B. suis , 14: blank control (No DNA template). 15: MM (Molecular Marker).

Thumbnail

Figure 2
1.5% agarose gel electrophoresis demonstrating the results after the mPCR was performed with the Jump Start enzyme (final concentration 0.1U uL^-1). Markers at intervals of 100 base pairs. In this robustness test, we did not observe the pattern of bands expected using this enzyme, and is therefore unsuitable for this reaction. Samples: 1 - DB 012/12 23 T1; 2 - DB 012/12 16 T1; 3 - DB 012/12 1 T1; 4 - DB 012/12 2 T1; 5 - DB 012/12 25 TI; 6 - DB 012/12 41 T1; 7 - DB 012/12 26 T1; 8 - B. abortus biovar 1. This same profile is observed to B . abortus biovars 2 and 4; 9 - B . abortus S19; 10 - B . abortus biovar 1; 11 - B . abortus biovar 3b. This same profile is observed to B. abortus biovars 5, 6 and 9; 12 - B. melitensis ; 13 - B. suis ; 14 - Blank (No DNA template); 15 - MM (Molecular Marker).

Thumbnail

Figure 3
1.5% agarose gel electrophoresis demonstrating the results after the mPCR, which was performed with the Taq Platinum enzyme (final concentration of 0.05U uL^-1). Just as was observed with the Jump Start enzyme, we did not observed the pattern of bands expected in this reaction. Samples: 1 - DB 012/12 23 T1; 2 - DB 012/12 16 T1; 3 - DB 12/12 1 T1; 4 - DB 12/12 2 T1; 5 - DB 12/12 25 T1; 6 - DB 12/12 41 T1; 7 - DB 12/12 26 T1; 8 - B. abortus biovar 1. This same profile is observed to B. abortus biovars 2 and 4; 9 - B. abortus S19; 10 - B. abortus biovar 1; 11 - B. abortus biovar 3b. This same profile is observed to B. abortus biovars 5, 6 and 9; 12 - B. melitensis ; 13 - B. suis ; 14 - Blank (No DNA template); 15 - MM (Molecular Marker).

Thumbnail

Table 1
DNA sequence of the primers used in the validation of the mPCR, gene target and reference.

Thumbnail

Table 2
Electrophoresis profiles of Brucella spp. observed according to the primers used on mPCR.

Thumbnail

Table 3
List of biovars of Brucella abortus identified in bacterial isolation and their Brazilian State.

Figure 1 1.5% agarose gel electrophoresis showing the different patterns for each species and biovars of B . abortus using the GoTaq enzyme. Markers at intervals of 100 base pairs. 1 to 7: B. abortus , samples used in repeatability test. 8: B. abortus biovar 1. This same profile is observed to B. abortus biovars 2 and 4; 9: B. abortus S19. 10: B. abortus biovar 1; 11: B. abortus biovar 3b. This same profile is observed to B. abortus biovars 5, 6 and 9; 12: B. melitensis and 13: B. suis , 14: blank control (No DNA template). 15: MM (Molecular Marker).

Figure 2 1.5% agarose gel electrophoresis demonstrating the results after the mPCR was performed with the Jump Start enzyme (final concentration 0.1U uL^-1). Markers at intervals of 100 base pairs. In this robustness test, we did not observe the pattern of bands expected using this enzyme, and is therefore unsuitable for this reaction. Samples: 1 - DB 012/12 23 T1; 2 - DB 012/12 16 T1; 3 - DB 012/12 1 T1; 4 - DB 012/12 2 T1; 5 - DB 012/12 25 TI; 6 - DB 012/12 41 T1; 7 - DB 012/12 26 T1; 8 - B. abortus biovar 1. This same profile is observed to B . abortus biovars 2 and 4; 9 - B . abortus S19; 10 - B . abortus biovar 1; 11 - B . abortus biovar 3b. This same profile is observed to B. abortus biovars 5, 6 and 9; 12 - B. melitensis ; 13 - B. suis ; 14 - Blank (No DNA template); 15 - MM (Molecular Marker).

Figure 3 1.5% agarose gel electrophoresis demonstrating the results after the mPCR, which was performed with the Taq Platinum enzyme (final concentration of 0.05U uL^-1). Just as was observed with the Jump Start enzyme, we did not observed the pattern of bands expected in this reaction. Samples: 1 - DB 012/12 23 T1; 2 - DB 012/12 16 T1; 3 - DB 12/12 1 T1; 4 - DB 12/12 2 T1; 5 - DB 12/12 25 T1; 6 - DB 12/12 41 T1; 7 - DB 12/12 26 T1; 8 - B. abortus biovar 1. This same profile is observed to B. abortus biovars 2 and 4; 9 - B. abortus S19; 10 - B. abortus biovar 1; 11 - B. abortus biovar 3b. This same profile is observed to B. abortus biovars 5, 6 and 9; 12 - B. melitensis ; 13 - B. suis ; 14 - Blank (No DNA template); 15 - MM (Molecular Marker).

Table 1 DNA sequence of the primers used in the validation of the mPCR, gene target and reference.

Table 2 Electrophoresis profiles of Brucella spp. observed according to the primers used on mPCR.

Table 3 List of biovars of Brucella abortus identified in bacterial isolation and their Brazilian State.

Como citar

copiar

Universidade Federal de Santa Maria Universidade Federal de Santa Maria, Centro de Ciências Rurais , 97105-900 Santa Maria RS Brazil , Tel.: +55 55 3220-8698 , Fax: +55 55 3220-8695 - Santa Maria - RS - Brazil
E-mail: cienciarural@mail.ufsm.br

Acompanhe os números deste periódico no seu leitor de RSS

Versão para download de PDF

PDF

Inglês

Versões e tradução automática

Versão original do texto

English

Tradução automática

Google Translator
Microsoft Translator

Como citar

RIS

BIBTEX

Outros formatos de citação e exportação:

SciELO - Scientific Electronic Library Online
Rua Dr. Diogo de Faria, 1087 – 9º andar – Vila Clementino 04037-003 São Paulo/SP - Brasil
E-mail: scielo@scielo.org

Leia a Declaração de Acesso Aberto

Métricas

<i>Validação da técnica de PCR multiplex para identificação de Brucella spp.</i>

PlumX

Mensagem

[1] ^*Corresponding author: Antônio Augusto Fonseca Júnior, email: antonio.a.fonsecajr@gmail.com.