Resfriamento de sêmen suíno em um diluente suplementado com isoespintanol

Betancur, Giovanni Restrepo; Zapata, Kelly Vanessa; Vidal, Paola Andrea Colorado; Sánchez, Yudith; Rojano, Benjamín Alberto

RESUMO:

Durante a refrigeração, os espermatozoides sofrem estresse oxidativo, osmótico, químico e térmico, que diminuem sua qualidade e afetam sua capacidade de fertilização. A adição de antioxidantes ao diluente espermático é uma alternativa para mitigar essas alterações. O objetivo desta pesquisa foi avaliar o efeito do isospintanol (ISO) na refrigeração do sêmen suíno. Quinze ejaculados de cinco varrascos (Sus scrofa domestica) foram diluídos em BTS suplementado com ISO a 0 (controle), 5 (ISO5), 10 (ISO10), 15 (ISO15), 20 (ISO20), 25 (ISO25) e 30 (ISO30) µM e foram refrigerados por cinco dias a 16 °C. A motilidade total (MT), motilidade progressiva (MP) e cinética dos espermatozóides foram avaliadas a cada 24 h com um sistema CASA IVOS. Nos dias um e cinco de refrigeração, foram avaliadas a funcionalidade da membrana, a capacidade antioxidante total (CAT), as espécies reativas de oxigênio (ROS) e o potencial de membrana mitocondrial (Δ¥M), através do teste hiposmótico (HOS), espectrofluorimetría e citometria de fluxo. Foram realizadas análises de regressão e comparação de médias, pelo teste de Duncan. A adição de ISO teve pouca influência na motilidade espermática, apresentando apenas redução na MT em 24 h de refrigeração, devido à adição de 20 µM. Da mesma forma, não foi observada influência de ISO na cinética e integridade funcional da membrana em 96 horas de refrigeração; porém, os coeficientes de regressão mostraram que ISO produziu menor taxa de diminuição da motilidade e proporção de espermatozoides rápidos dependendo da concentração utilizada. ISO não influenciou significativamente na CAT do sêmen refrigerado; entretanto, diferentes concentrações de ISO reduziram a produção de EROs a partir do sêmen após de 96 h de refrigeração. ISO também influenciou o Δ¥M dos espermatozóides em 0 h de refrigeração, com aumento das células de baixo Δ¥M e diminuição das células de alto Δ¥M. Em conclusão, o isospintanol pode reduzir a perda da qualidade e o estresse oxidativo do sêmen suíno durante a refrigeração e pode modular a atividade mitocondrial do esperma.

Palavras-chave:
Antioxidante; suíno; preservação; qualidade do sêmen; espermatozoides

[1] E-mail: grestre0@unal.edu.com. *Corresponding author.

	VAP	VSL	VCL	ALH	BCF	STR	LIN	RAP
---------------------------------------------------------------------------------0 h-------------------------------------------------------------------------------
CONTROL	50.7 ± 3.2	42.9 ± 2.3	96.7 ± 4.0^ab	5.0 ± 0.2	42.4 ± 0.7^a	78.2 ± 1.7^a	46.0 ± 2.1^a	52.4 ± 4.6
ISO5	49.9 ± 3.9	39.7 ± 2.4	100.4 ± 5.0^ab	5.3 ± 0.2	42.3 ± 0.6^ab	75.4 ± 1.4^ab	40.6 ± 1.0^b	51.7 ± 6.8
ISO10	51.5 ± 2.6	38.4 ± 2.1	95.8 ± 4.3^ab	5.3 ± 0.2	40.2 ± 0.7^b	75.6 ± 1.5^ab	43.0 ± 1.4^ab	43.0 ± 4.7
ISO15	51.8 ± 2.3	39.7 ± 1.6	94.1 ± 3.8^ab	5.2 ± 0.2	40.3 ± 0.8^ab	77.2 ± 1.1^ab	44.5 ± 1.3^ab	46.1 ± 4.9
ISO20	51.4 ± 3.4	66.0 ± 27.0	95.0 ± 5.1^ab	5.3 ± 0.2	41.0 ± 0.8^ab	76.4 ± 1.3^ab	43.0 ± 1.5^ab	43.9 ± 6.7
ISO25	49.9 ± 3.6	38.4 ± 2.8	92.1 ± 5.5^b	5.1 ± 0.2	41.0 ± 0.5^ab	77.6 ± 1.4^a	43.4 ± 1.5^ab	40.5 ± 6.2
ISO30	53.6 ± 2.1	39.3 ± 1.4	103.2 ± 4.5^a	5.5 ± 0.2	41.4 ± 1.0^ab	74.0 ± 1.3^b	40.2 ± 1.3^b	48.8 ± 3.8
-------------------------------------------------------------------------------24 h-------------------------------------------------------------------------------
CONTROL	50.8 ± 2.8^a	36.4 ± 1.9^a	97.2 ± 5.6	5.7 ± 0.2	38.1 ± 1.1	73.0 ± 1.8	40.7 ± 1.8	39.0 ± 5.2^a
ISO5	52.8 ± 2.0^a	38.9 ± 1.3^a	100.3 ± 4.8	5.5 ± 0.3	39.4 ± 1.2	74.6 ± 1.8	42.1 ± 1.9	42.4 ± 4.2^a
ISO10	45.7 ± 2.5^b	33.9 ± 2.0^b	88.4 ± 3.7	5.5 ± 0.2	39.0 ± 1.3	74.8 ± 1.4	40.8 ± 1.6	31.0 ± 4.9^b
ISO15	46.1 ± 2.3^b	31.8 ± 1.6^b	91.8 ± 4.0	6.1 ± 0.2	37.9 ± 0.7	72.7 ± 1.6	39.0 ± 1.7	33.2 ± 4.8^b
ISO20	46.8 ± 2.5^b	33.5 ± 1.5^b	94.2 ± 4.5	6.0 ± 0.2	65.5 ± 26.9	73.1 ± 1.6	38.8 ± 1.6	34.4 ± 4.8^a
ISO25	49.2 ± 2.1^a	35.9 ± 1.6^a	96.7 ± 3.9	5.5 ± 0.3	63.4 ± 23.1	74.2 ± 2.0	40.4 ± 2.0	39.7 ± 5.2^a
ISO30	47.5 ± 2.2^b	33.7 ± 1.5^b	165.4 ± 2.4	5.8 ± 0.2	63.7 ± 24.3	72.6 ± 2.1	39.4 ± 2.4	33.0 ± 4.0^b
-------------------------------------------------------------------------------48 h-------------------------------------------------------------------------------
CONTROL	45.1 ± 3.2	33.3 ± 2.5	91.5 ± 5.6	5.7 ± 0.3	38.7 ± 1.2^b	74.0 ± 1.7	38.8 ± 1.7	29.4 ± 5.1
ISO5	47.1 ± 2.8	34.5 ± 1.9	91.7 ± 5.2	5.7 ± 0.3	82.5 ± 29.7^a	74.2 ± 1.5	67.2 ± 27.1	31.4 ± 4.4
ISO10	48.4 ± 2.7	31.7 ± 1.8	98.3 ± 4.5	6.2 ± 0.2	40.1 ± 1.2^b	72.4 ± 1.2	37.9 ± 1.3	32.9 ± 4.8
ISO15	43.4 ± 2.8	31.2 ± 1.8	89.4 ± 4.9	5.8 ± 0.2	40.3 ± 1.0^b	73.5 ± 1.5	37.8 ± 1.3	26.5 ± 4.7
ISO20	43.7 ± 3.0	32.0 ± 2.3	88.4 ± 5.7	5.4 ± 0.2	40.1 ± 1.0^b	74.8 ± 2.0	40.3 ± 2.5	29.9 ± 5.7
ISO25	46.9 ± 2.9	33.0 ± 1.8	94.7 ± 5.4	5.9 ± 0.2	40.1 ± 1.0^b	72.6 ± 2.2	38.2 ± 2.1	32.4 ± 4.4
ISO30	45.9 ± 2.8	32.4 ± 1.7	88.8 ± 5.8	5.4 ± 0.4	38.9 ± 1.1^b	74.5 ± 2.4	41.5 ± 2.4	32.1 ± 4.8
-------------------------------------------------------------------------------72 h-------------------------------------------------------------------------------
CONTROL	46.7 ± 3.4	33.4 ± 1.9	91.2 ± 7.7	6.2 ± 0.3^a	36.0 ± 2.0	73.7 ± 2.8^a	44.0 ± 3.9	27.2 ± 5.7
ISO5	51.1 ± 3.7	36.3 ± 2.4	101.4 ± 7.4	6.0 ± 0.2^a	38.8 ± 0.9	73.0 ± 2.0^a	40.2 ± 2.7	30.7 ± 5.2
ISO10	49.3 ± 3.9	37.9 ± 3.3	91.3 ± 6.6	5.3 ± 0.3^a	38.5 ± 1.1	77.6 ± 1.9 ^a	45.3 ± 2.6	32.0 ± 6.8
ISO15	47.8 ± 3.7	34.3 ± 2.6	95.0 ± 7.0	6.0 ± 0.3^a	38.3 ± 0.9	73.7 ± 2.0^a	41.0 ± 2.5	29.2 ± 4.7
ISO20	51.6 ± 3.6	35.4 ± 2.4	100.0 ± 7.6	5.1 ± 0.5^b	40.1 ± 1.6	70.4 ± 3.6^a	39.8 ± 3.8	32.4 ± 5.1
ISO25	49.7 ± 3.5	36.2 ± 2.7	102.7 ± 8.3	5.9 ± 0.3^a	38.8 ± 1.1	73.5 ± 1.8^a	38.2 ± 2.0	33.0 ± 6.2
ISO30	44.4 ± 4.7	31.5 ± 3.4	89.0 ± 9.2	4.9 ± 0.6^b	36.2 ± 2.9	68.0 ± 5.7^b	37.3 ± 4.6	24.8 ± 4.4
-------------------------------------------------------------------------------96 h-------------------------------------------------------------------------------
CONTROL	45.5 ± 3.3	34.0 ± 2.9	89.6 ± 4.6	5.6 ± 0.3^a	39.1 ± 1.1	76.1 ± 1.8	40.5 ± 1.7	24.0 ± 6.5
ISO5	49.3 ± 3.7	34.6 ± 2.6	95.8 ± 6.6	6.1 ± 0.3^a	36.9 ± 1.2	73.3 ± 1.8	40.6 ± 2.0	28.3 ± 5.8
ISO10	47.1 ± 3.3	33.3 ± 2.5	91.5 ± 6.1	5.2 ± 0.6^a	35.0 ± 2.2	74.8 ± 2.7	41.7 ± 2.7	25.7 ± 5.2
ISO15	46.5 ± 3.1	33.4 ± 2.4	94.3 ± 5.9	5.9 ± 0.3^a	39.6 ± 1.2	74.3 ± 2.3	38.9 ± 1.6	23.0 ± 2.9
ISO20	48.6 ± 3.7	33.5 ± 3.1	95.8 ± 6.6	5.3 ± 0.4^a	39.6 ± 1.8	70.7 ± 3.6	37.6 ± 2.5	25.8 ± 4.4
ISO25	50.0 ± 4.7	36.2 ± 3.5	98.0 ± 8.9	5.3 ± 0.5^a	37.7 ± 2.3	74.7 ± 2.92	40.3 ± 2.5	30.5 ± 5.5
ISO30	44.7 ± 5.2	32.1 ± 3.2	88.6 ± 9.4	4.5 ± 0.7^b	39.9 ± 1.8	75.8 ± 2.9	40.1 ± 3.0	26.7 ± 6.9

COOLING TIME (h)	-------------------TREATMENT-----------------------	---------------------------HOS---------------------------
0	CONTROL	49.80 ± 2.06 ^a
	ISO5	48.30 ± 2.08 ^ab
	ISO10	43.90 ± 2.14 ^b
	ISO15	49.70 ± 2.77 ^a
	ISO20	50.10 ± 2.91 ^a
	ISO25	45.30 ± 2.45 ^ab
	ISO30	44.90 ± 1.97 ^ab
96	CONTROL	42.77 ± 2.91
	ISO5	41.33 ± 3.71
	ISO10	36.44 ± 3.73
	ISO15	42.44 ± 2.45
	ISO20	42.33 ± 4.12
	ISO25	39.78 ± 2.92
	ISO30	39.22 ± 3.88

VARIABLE	CONTROL	ISO5	ISO10	ISO15	ISO20	ISO25	ISO30
TM	-0.372^*	-0.175	-0.185^*	-0.212^*	-0.227^*	-0.172^*	-0.247^*
PM	-0.314^*	-0.266^*	-0.144	-0.222^*	-0.209	-0.082	-0.219^*
VAP	-0.048	-0.007	-0.008	-0.044	-0.036	0.033	-0.057
VSL	-0.101	-0.055	-0.057	-0.068	-0.076	-0.008	-0.052
VCL	-0.115	-0.098	0.063	0.058	0.023	0.131	-0.113
ALH	0.001	0.004	0.006	0.006	0.001	0.006	-0.008
BCF	-0.046^*	-0.056^*	-0.036	-0.005	-0.014	-0.045	-0.024
STR	-0.009	-0.016	-0.063	-0.048	-0.091	-0.049	0.002
LIN	-0.043	0.018	-0.062	-0.090^*	-0.083	-0.041	0.008
RAP	-0.328^*	-0.266^*	-0.109	-0.213^*	-0.174	-0.047	-0.213^*
HOS	-0.073	-0.076	-0.078	-0.076	-0.081	-0.058	-0.059

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